Amplite 荧光细胞外一氧化氮（NO）活性测定试剂盒

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产品优势

可高灵敏度、高选择性地特异性检测胞外环境中的NO

适用范围

用于一氧化氮检测

产品介绍

一氧化氮（NO）作为重要的生物调节分子，参与多种生理和病理过程。NO生成异常与免疫系统疾病、心血管疾病、神经退行性疾病及炎症性疾病密切相关。由于NO作为自由基极易被氧化，其在生物系统中的浓度通常较低，这使得传统检测方法在NO功能研究上面临重大挑战。

AAT Bioquest公司推出了一系列用于活细胞NO监测的检测试剂盒。Amplite®胞外荧光法一氧化氮定量检测试剂盒提供了一种快速检测细胞培养上清、组织样本及其他生物溶液中NO水平的方法。与常用的DAF-2探针相比，本试剂盒（货号16365）采用细胞非渗透性NO传感器DAW-J2，可高灵敏度、高选择性地特异性检测胞外环境中的NO。非荧光性的DAW-J2探针与NO反应后生成强红色荧光产物，便于通过酶标仪进行检测。

样本实验方案

概述

1.准备一氧化氮工作溶液（50 µL）
2.加入一氧化氮标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监控荧光强度

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAW-J2储备溶液（200X）：
将25 mL DMSO加入小瓶DAW-J2（组分A）中，制成200X储备溶液。

1.2 一氧化氮标准溶液（100 mM，未提供）：
我们使用DEA NONOate（Cayman Chemical，货号82100，CAS＃372965-00-9）作为一氧化氮标准。 一氧化氮的标准溶液在0.01N NaOH中的浓度为100 mM。

2.标准溶液

一氧化氮标准
将10 µL 100 mM NONOate标准溶液添加到990 uL分析缓冲液（组分B）中，以生成1 mM一氧化氮标准溶液（SD7）。然后进行1：2系列稀释，以得到系列稀释的一氧化氮标准液（SD6-SD1）。注意：稀释的NONOate标准溶液不稳定，应立即使用。

3.工作溶液

将25 µL DAW-J2 200X储备溶液加入5 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合。 注意：此一氧化氮工作溶液足以进行100次测定。工作溶液不稳定，请及时使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1：黑色96孔微孔板中一氧化氮标准品和测试样品的布局。 SD =标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2：每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将一氧化氮标准液（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是每孔50 µL。

2.将50 µL一氧化氮工作溶液添加至标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使一氧化氮总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请在每个孔中使用25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.使用荧光酶标仪在激发= 570 nm，发射= 610 nm（截止= 590 nm）下监控荧光的增加。