Amplite 荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

在100µL反应体系中最低可检测至0.05 mU/mL的葡萄糖氧化酶活性。

 

适用范围

用于葡萄糖氧化酶检测

 

产品介绍

葡萄糖氧化酶是一种二聚体蛋白，能够催化β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和D-葡萄糖酸-1,5-内酯（后者会自发水解为葡萄糖酸）。该酶在临床上广泛应用于体液葡萄糖检测，同时在食品工业中用于清除饮料、食品及其他农产品中的残留葡萄糖和氧气。此外，葡萄糖氧化酶还是生物传感器检测葡萄糖的核心元件。

Amplite®葡萄糖氧化酶检测试剂盒提供了一种快速、灵敏的溶液葡萄糖氧化酶检测方案。该试剂盒支持96孔或384孔微孔板检测，无需分离步骤即可实现自动化操作。其采用独特的Amplite® Red底物，支持双信号读取模式——既可通过荧光酶标仪检测荧光信号，也可通过吸光酶标仪进行吸光度测定。经测试，使用Amplite®荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒，在100µL反应体系中最低可检测至0.05 mU/mL的葡萄糖氧化酶活性。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备GO工作溶液（50μL）
2.添加葡萄糖氧化酶标准品或测试样品（50μL）
3.在37°C孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。

注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

2. HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶（组分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

 

2.标准溶液

葡萄糖氧化酶标准
通过将2μL的100U / mL葡萄糖氧化酶标准溶液稀释到200μL的测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖氧化酶标准品，以具有1000mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液。 然后取10μL1000mU/ mL葡萄糖氧化酶标准溶液，进行1：100稀释，得到10mU / mL葡萄糖氧化酶标准溶液（GOS7）。然后进行1：3连续稀释以获得剩余的连续稀释的葡萄糖氧化酶标准品（GOS6-GOS1）。包括非葡萄糖氧化酶缓冲液作为空白对照。 终的葡萄糖氧化酶浓度应低两倍（即0至5mU / mL）。

注意：高浓度的葡萄糖氧化酶可能会因Amplite Red（非荧光产物）的过氧化而导致荧光信号降低。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液（250X），100μLHRP储备液（50X）和500μL葡萄糖储备液（10X）加入4.3 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5 mL葡萄糖氧化酶（GO）工作溶液。 避光。

 

样品分析

表1.固体黑色96孔微孔板中葡萄糖氧化酶标准品和测试样品的布局。 GOS =葡萄糖氧化酶标准品（GOS1-GOS7,0.01至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
GOS1	GOS1	...	...
GOS2	GOS2	...	...
GOS3	GOS3
GOS4	GOS4
GOS5	GOS5
GOS6	GOS6
GOS7	GOS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
GOS1-GOS7	50ul	连续稀释（0.01至10 miU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	样品

1.根据表1和表2中提供的布局制备葡萄糖氧化酶标准品（GOS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.在葡萄糖氧化酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGO工作溶液，使总葡萄糖氧化酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应在37°C孵育10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）监测荧光强度。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 然而，与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。