Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

1.兼容96孔和384孔微孔板；

2.无需分离步骤，即适用于自动化操作；

3.超高的检测灵敏度满足各类研究需求；

 

适用范围

用于谷氨酸检测

 

产品介绍

谷氨酸氧化酶是氧化还原酶家族的重要成员，专一性作用于以CH-NH₂为供体、氧气为受体的生化反应。该酶能高效催化L-谷氨酸在水和氧存在下的氧化脱氨过程，其反应产物包括α-酮戊二酸、氨和过氧化氢。

Amplite®荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒为溶液样本和细胞裂解液中的酶活性检测提供了快速、超灵敏的解决方案。检测过程中，谷氨酸氧化酶将L-谷氨酸转化为α-酮戊二酸、NH₃和H₂O₂。通过引入L-丙氨酸和L-谷氨酸-丙酮酸转氨酶，可实现反应循环放大，显著提升H₂O₂的生成量。

本试剂盒采用专利Amplite® Red底物，支持双模式检测：荧光检测模式（推荐）：灵敏度更高； 吸光度检测模式：操作更便捷。在100 µL反应体系中，最低可检测40 µU/mL的谷氨酸氧化酶活性。该检测方案具有兼容96孔和384孔微孔板；无需分离步骤，即适用于自动化操作；超高的检测灵敏度满足各类研究需求等优势

适用仪器

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荧光收酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

标准操作方案

简要概述

1.准备谷氨酸氧化酶标准品/测试样品（50 µL）

2.加入谷氨酸氧化酶工作液（50 µL）

3.室温孵育30-60分钟

4.在Ex / Em = 540 / 590nm处读取荧光强度

 

储备溶液制备

（注：未使用的储备液应分装保存于-20°C，避免反复冻融）

Amplite™ Red储备液（250X）：

取40 µL DMSO（组分F）加入Amplite™ Red（组分A）瓶中

注意事项：

1.现配现用

2.避免与硫醇类物质（如DTT、β-巯基乙醇）接触（反应体系中终浓度≤10 µM）

3.反应pH值需控制在7-8之间（推荐使用pH 7.4的配套缓冲液）

 

HRP储备液（400X）

取200 µL检测缓冲液（组分B）加入辣根过氧化物酶（组分C）瓶中

 

谷氨酸储备液（400X）

取1.0 mL双蒸水加入谷氨酸（组分D）瓶中

 

谷氨酸氧化酶标准溶液（150 mU/mL）

取100 µL检测缓冲液（组分B）加入冻干谷氨酸氧化酶标准品（组分E）瓶中

 

标准品梯度稀释

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11302

操作步骤：

1.取30 µL 150 mU/mL标准溶液加入420 µL检测缓冲液（组分B），配制10 mU/mL标准溶液（GO7）

2.对GO7进行1:3连续稀释，获得GO6-GO1梯度标准品

 

工作液配制

取5 mL检测缓冲液（组分B），依次加入：20 μL Amplite™ Red储备液（250X）、12.5 μL HRP储备液（400X）、12.5 μL谷氨酸储备液（400X）混匀后总体积5.07 mL，避光保存

 

样品分析

表1.固体黑色96孔微孔板中GO标准品和测试样品的布局。 GO =谷氨酸氧化酶标准品（GO1-GO7,0.01至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
GO1	GO1	...	...
GO2	GO2	...	...
GO3	GO3
GO4	GO4
GO5	GO5
GO6	GO6
GO7	GO7

表2.每个孔的试剂组成。 较高浓度的GO可能由于Amplite Red（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低

孔	容积	试剂
GO1-GO7	50ul	连续稀释（0.01至10 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样本

1.按照表1和表2的布局要求，分别配制谷氨酸氧化酶标准品（GO）、空白对照（BL）和测试样品（TS）。若使用384孔板，每孔试剂加样量调整为25 µL（标准96孔板为50 µL）

2.向标准品孔、空白对照孔和测试样品孔中各加入50 µL GO工作液，使96孔板每孔总反应体积达到100 µL。若使用384孔板，则每孔加入25 µL工作液，此时总反应体积为50 µL/孔。

3.将反应体系置于室温避光孵育30-60分钟。

4.使用荧光酶标仪监测荧光强度，检测参数设置为：激发波长530-570 nm（最佳540 nm），发射波长590-600 nm（最佳590 nm），截止波长570 nm。注：也可将反应液转移至白色透明底微孔板，用酶标仪在576±5 nm波长下进行吸光度检测，但灵敏度低于荧光检测法。