Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

100 µL反应体系中可检测低至10 µM的谷氨酸浓度

 

适用范围

用于谷氨酸检测

 

产品介绍

谷氨酸作为20种蛋白质氨基酸之一，其羧酸阴离子及盐类被称为谷氨酸盐。在神经系统中，谷氨酸作为一种重要的神经递质，不仅参与长时程增强效应的形成，更对学习记忆功能具有关键调节作用。值得注意的是，谷氨酸虽是γ-氨基丁酸（GABA）的前体物质，但两者在功能上却表现出显著的拮抗效应。近年研究发现，谷氨酸对维持心脏和前列腺的正常生理功能可能具有重要作用。作为少数能透过血脑屏障的营养物质之一，谷氨酸在多种神经系统疾病的治疗中展现出应用价值，包括：抑郁症、注意力缺陷障碍（ADD/ADHD）、慢性疲劳综合征、酒精依赖症、癫痫、肌营养不良、智力发育迟缓以及精神分裂症等疾病的辅助治疗。

Amplite®荧光法谷氨酸检测试剂盒为各类生物样本中的谷氨酸测定提供了快速灵敏的解决方案。该检测体系通过偶联酶系统催化L-谷氨酸与NADP反应生成NADPH，经特异性NADPH传感器识别后循环再生为NADP，在此过程中产生红色荧光产物。检测结果既可通过荧光酶标仪读取，也可使用吸光度酶标仪进行测定。

本试剂盒在100 µL反应体系中可检测低至10 µM的谷氨酸浓度。该检测方法稳定性优异，可广泛应用于各类需要谷氨酸定量分析的科研及临床检测场景。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em：	590nm
cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验操作流程

概述

1.配制谷氨酸工作液（50 µL）

2.加入谷氨酸标准品/测试样品（50 µL）

3.室温孵育30分钟-2小时

4.监测荧光强度（激发/发射波长=540/590 nm，截止波长570 nm）

 

储备液配制

（注：未使用的储备液应分装保存于-20°C，避免反复冻融）

NADP储备液（200X）：

取100 µL稀释缓冲液（组分E）加入NADP（组分C）瓶中，配制200X储备液

谷氨酸标准品溶液（100 mM）：

取200 µL稀释缓冲液（组分E）加入谷氨酸标准品（组分D）瓶中，配制100 mM标准溶液

 

标准品梯度稀释

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/10054

操作步骤

1.将100 mM谷氨酸标准品用稀释缓冲液（组分E）1:100稀释，获得1000 µM标准溶液（SD7）

2.取1000 µM标准溶液（SD7），用稀释缓冲液（组分E）按1:3连续稀释，获得SD6-SD1梯度标准品

工作液配制

1.向酶混合物（组分A）瓶中加入10 mL检测缓冲液（组分B）

2.加入50 µL 200X NADP储备液，混匀配制成谷氨酸工作液

注意事项： 

1.工作液可满足两块96孔板检测需求

2需避光并在2小时内使用

3.替代方案：可用200 µL水配制50X酶混合物储备液，再按比例与检测缓冲液和NADP储备液混合

 

样品方案

表1.表 1. 谷氨酸标准品和测试样品在纯黑色 96 孔微孔板中的布局。 SD = 谷氨酸标准品，BL = 空白对照，TS = 测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（1 到 1000 µM)）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样品

 

 

样品准备

1.按照表1和表2的布局，分别配制：谷氨酸标准品（SD）、空白对照（BL）、测试样品（TS）。384孔板调整：每孔加样量调整为25 µL（标准96孔板为50 µL）。

2.向谷氨酸标准品孔、空白对照孔及测试样品孔中分别加入谷氨酸工作液。96孔板：每孔加入50 µL谷氨酸工作液（总反应体积100 µL/孔）。384孔板：每孔加入25 µL工作液（总反应体积50 µL/孔）。

3.室温避光孵育30分钟至2小时。

4.荧光检测

激发波长：530-570 nm（最合适540 nm）

发射波长：590-600 nm（最合适590 nm）

截止波长：570 nm

注意：1.也可将反应液转移至白色透明底微孔板中，通过吸光度酶标仪检测570 nm与605 nm吸光度比值（A575nm/A605nm）。

          2.吸光度检测法的灵敏度低于荧光检测法。