Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

1.能在100 µL反应体系中检测低至1pmol（10⁻¹²mol）的半胱氨酸或谷胱甘肽（GSH）

2.兼容96孔或384孔微孔板检测

3.无需分离步骤，可直接适配自动化系统

 

适用范围

用于检测谷胱甘肽

 

产品介绍

生物样本中还原型与氧化型谷胱甘肽（GSH）的监测对于评估细胞和组织的氧化还原状态及解毒功能至关重要，这直接关系到谷胱甘肽在抵抗氧化应激和自由基介导的细胞损伤中的保护作用。半胱氨酸代谢异常主要包括两种疾病：由溶酶体转运缺陷引起的常染色体隐性遗传病胱氨酸贮积症，以及常见的氨基酸转运遗传性疾病胱氨酸尿症。作为蛋白质组成氨基酸中的特殊成员，半胱氨酸具有独特的生物学特性。目前市场上可用于生物体系硫醇定量检测的试剂或试剂盒选择有限，且现有商业化产品普遍存在灵敏度不足或操作流程繁琐等问题。

Amplite®荧光法谷胱甘肽定量检测试剂盒提供了超灵敏的GSH检测解决方案，采用专利非荧光染料技术，该染料与硫醇类物质特异性结合后可产生强荧光信号，通过灵敏的单步荧光检测法，能在100 µL反应体系中检测低至1pmol（10⁻¹²mol）的半胱氨酸或谷胱甘肽（GSH）；该检测方案支持96孔或384孔微孔板操作模式，无需分离步骤即可直接适配自动化检测系统，检测结果可通过荧光酶标仪快速读取。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em：	590nm
cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

标准操作流程

简要概述

1.配制GSH工作液（50 µL）

2.加入GSH标准品/测试样品（50 µL）

3.室温孵育10-60分钟

4.监测荧光强度变化（激发/发射波长=490/525 nm，截止波长515 nm）

 

细胞样本制备指南

详见：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

储备液配制

（注：未使用的储备液应分装保存于-20°C，避免反复冻融）

GSH标准溶液（1 mM）：

取200 µL检测缓冲液（组分B）加入GSH标准品（组分C）瓶中，配制成1 mM（1 nmol/µL）标准溶液

Thiolite™ Green储备液（100X）：

取100 µL DMSO（组分D）加入Thiolite™ Green（组分A）瓶中

注：若配制工作液时出现沉淀，可改用200 µL DMSO配制50X储备液

 

标准品梯度稀释

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/10055

操作步骤：

1.取30 µL 1 mM GSH标准溶液加入970 µL检测缓冲液（组分B），配制成30 µM（30 pmol/µL）中间液

2.取30 µM中间液按1:3进行连续稀释，获得SD7-SD1梯度标准品

注：稀释后标准品稳定性差，需在4小时内使用

 

工作液配制

取5 mL检测缓冲液（组分B），加入50 µL 100X Thiolite™ Green储备液，混匀即得

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  -  SD7,0.01至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（0.01至10μM）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样本

1.按表1和表2所示布局准备：GSH标准品（SD）、空白对照（BL）、测试样品（TS），384孔板调整：每孔加样量改为25 µL（标准96孔板为50 µL）

注：细胞或组织样本需按实验需求进行预处理

2.在GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入工作溶液，96孔板：每孔加入50 µL GSH工作液（总反应体积100 µL/孔），384孔板：每孔加入25 µL工作液（总反应体积50 µL/孔）

3.在室温避光10至60分钟。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下检测荧光强度。