Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

1.兼容96孔和384孔微孔板

2.在100µL反应体系中，可检测低至1mU/mL的SSAO酶活性

 

适用范围

用于单胺氧化酶（MAO）检测

 

产品介绍

单胺氧化酶（MAO）是一类含黄素的胺氧化还原酶，可催化单胺类物质的氧化反应。这类酶广泛分布于肝脏、肠黏膜及神经组织等部位的线粒体外膜上。人体中存在两种MAO亚型：MAO-A和MAO-B，其中MAO-A在代谢食物摄入的单胺类物质中起关键作用。MAO家族对神经递质的失活过程具有重要调控功能，其功能异常与抑郁症、精神分裂症、药物成瘾、注意力缺陷障碍、偏头痛及性发育异常等多种疾病相关。

Amplite®单胺氧化酶检测试剂盒为血液及其他生物样本中的单胺氧化酶和半卡巴肼敏感胺氧化酶（SSAO）活性检测提供了快速灵敏的解决方案。该试剂盒采用Amplite®Red荧光底物，支持双信号读取模式，既可通过荧光酶标仪也可通过吸光度酶标仪进行检测。在100µL反应体系中，本试剂盒可检测低至1mU/mL的SSAO酶活性。检测过程兼容96孔或384孔微孔板模式，并能轻松实现自动化操作。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.MAO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MAO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite TM Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。

注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

2. HRP股票解决方案（200X）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.血浆胺氧化酶（PAO）标准溶液（20 U / mL）：
将125μL测定缓冲液（组分B）加入等离子体胺氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。

 

2.标准溶液

谷氨酸氧化酶标准
将30μL150mU/ mL GO标准溶液加入420μL测定缓冲液（组分B）中，得到10mU / mL GO标准溶液（GO7）。 取10 mU / mL GO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的GO标准品（GO6-GO1）。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite Red原液（250X），25μLHRP储备液（200X）和25μLMAO底物（组分D）加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5.07 mL 单胺氧化酶（MAO）工作溶液,避光。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中PAO标准品和测试样品的布局。 PAO =血浆胺氧化酶标准品（PAO1-PAO7,1至1000mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
PAO1	PAO1	...	...
PAO2	PAO2	...	...
PAO3	PAO3
PAO4	PAO4
PAO5	PAO5
PAO6	PAO6
PAO7	PAO7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
PAO1-PAO7	50ul	连续稀释（1至1000 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	样品

1.根据表1和表2中提供的布局，将血浆胺氧化酶标准品（PAO），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔固体黑色微孔板中。对于384孔板，使用25每孔μL试剂代替50μL。

2.在PAO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMAO工作溶液，使总PAO测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLMAO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。然而，与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。