Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒 蓝色荧光

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产品优势

1.兼容96孔或384孔微孔板检测，无需分离步骤即可实现自动化操作

2.在100 µL反应体系中，可检测低至0.3 mU/mL的神经氨酸酶活性

适用范围

用于神经氨酸酶检测

产品介绍

神经氨酸酶（又称唾液酸酶）是一类糖苷水解酶，能够催化末端唾液酸和神经氨酸的水解反应。其中，病毒神经氨酸酶最为人所熟知。该酶通过切断唾液酸与相邻糖残基的连接键，既促进病毒穿透黏液层，又破坏宿主细胞表面的血凝素受体，从而使子代病毒颗粒从感染细胞中释放。神经氨酸酶不仅能促进流感病毒从感染细胞中释放，还能加速病毒在呼吸道的扩散，因此是抗流感药物研发的重要靶点。神经氨酸酶的检测及其抑制剂的筛选，是研究生物过程和预防流感感染的关键环节。目前市售的神经氨酸酶检测试剂盒普遍操作繁琐。

Amplite®荧光法神经氨酸酶检测试剂盒提供了一种灵敏、稳定的检测方案，可检测细胞或生物样本中的神经氨酸酶活性。其原理是：非荧光底物经神经氨酸酶切割后产生强荧光信号。在100 µL反应体系中，可检测低至0.3 mU/mL的神经氨酸酶活性，支持96孔或384孔微孔板检测模式，无需分离步骤即可实现自动化操作，检测结果可通过荧光酶标仪直接读取。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备神经氨酸酶工作溶液（50 µL）
2.加入神经氨酸酶标准品或测试样品（50 µL）
3.在37°C或室温下孵育1-2小时
4.检测Ex / Em = 320/460 nm（cutoff= 420 nm）的荧光增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 神经氨酸酶标准溶液（2U / mL）：
将50 µL ddH₂O加入小瓶神经氨酸酶标准品（组分C）中，制成约2 U / mL神经氨酸酶标准溶液。

1.2 FluLite 蓝色原液（200X）：
将50 µL ddH₂O加入FluLite Blue（组分A）小瓶中，制成200X储备溶液。

2.标准溶液

为方便起见，请使用连续稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/12602

神经氨酸酶标准品
将10 µL的2 U / mL神经氨酸酶标准储备液加到990 µL的测定缓冲液（组分B）中，以生成20 mU / mL的神经氨酸酶标准品（NA7）。 取20 mU / mL神经氨酸酶标准溶液，并按1：2进行系列稀释，以使用分析缓冲液（组分B）获得系列稀释的神经氨酸酶标准品（NA6-NA1）。

注意：稀释的神经氨酸酶标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

3.工作溶液

加入25 μL 200X FluLite Blue原液至5ml 缓冲液 （Component B）中，混合成神经氨酸酶工作液。

样品操作及分析

表1.黑色固体96孔微孔板中神经氨酸酶标准品和测试样品的布局。 NA =神经氨酸酶标准品（NA1-NA7，0.312至20 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备神经氨酸酶标准品（NA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向神经氨酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50μL神经氨酸酶工作溶液，以使神经氨酸酶测定的总体积为100μL/孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL神经氨酸酶工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光的条件下，将反应在37°C或室温下孵育1至2小时。 注意：37°C孵育可获得更好的结果。

4.用荧光酶标仪监测在Ex / Em = 320/460 nm（cutoff= 420 nm）处的荧光增加。