Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

1.兼容荧光酶标仪和分光光度计检测

2.灵敏度可达皮摩尔级

 

适用范围

用于过亚硝酸盐定量检测

 

产品介绍

过氧亚硝酸根（ONOO⁻）是一种强氧化性物质，也是一种高活性硝化剂。它由细胞内产生的超氧阴离子自由基与一氧化氮反应生成，可对多种生物分子（包括蛋白质、酶、脂质和核酸）造成损伤，最终导致细胞死亡。由于过氧亚硝酸根的半衰期极短且稳态浓度低，检测和定量溶液中的过氧亚硝酸根一直是一项挑战。

Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光 采用DAX-J2™ PON Green 99荧光探针，该探针与ONOO-特异性反应生成强绿色荧光产物，对其他活性氧(ROS)和活性氮(RNS)物质具有高度选择性。本试剂盒兼容荧光酶标仪和分光光度计检测，灵敏度可达皮摩尔级，为氧化应激研究提供可靠工具。

样品实验方案 

储备溶液制备 

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免反复冻融

 DAX-J2 PON Green 99储备溶液（500X）：

向DAX-J2™ PON Green 99（组分A）瓶中加入20 μL DMSO（组分C）

注：20 μL复溶储备液可满足1块96孔板检测，需避光保存

 

过氧亚硝酸盐（ONOO¯）储备液（需自备）

参照文献方法合成：将亚硝酸钠（0.6 M）与过氧化氢（0.7 M）混合，加入盐酸（0.6 M）酸化后1-2秒内添加氢氧化钠（1.5 M）碱化，通过二氧化锰短柱去除过量过氧化氢

关键参数：0.1 M NaOH中ONOO¯在302 nm处摩尔消光系数为1670 M⁻¹cm⁻¹

注意：需现配现用

 

标准溶液制备

过氧亚硝酸盐标准曲线 

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/16316

1.用检测缓冲液（组分B）稀释ONOO¯储备液至20 μM。

2.按1:2梯度稀释制备O7-O1系列标准液

 

工作液配制

向10 mL检测缓冲液（组分B）中加入20 μL 500× DAX-J2™储备液，混匀

注：本配制量可满足1块96孔板检测；需严格避光操作

 

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中ONOO标准品和测试样品的布局。 O = ONOO标准（O1-O7，0.313至20 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
O1	O1	...	...
O2	O2	...	...
O3	O3
O4	O4
O5	O5
O6	O6
O7	O7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
O1-O7	50ul	系列稀释液（0.313至20 µM）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和表2提供的布局，准备ONOO标准品（O），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL工作溶液添加到ONOO标准，空白对照和测试样品的每个孔中，以使ONOO测定总体积为100 µL /孔。 384孔板，每孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.室温避光孵育反应5至10分钟。

4.使用荧光板读数器监测Ex / Em = 490/530 nm（在515 nm处截止）的荧光增加。