Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

1.稳定性好，适用于高通量筛选

2.兼容96孔和384孔荧光微孔板

适用范围

用于蛋白酶体20S活性检测

产品介绍

Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒采用均相荧光检测技术，可定量培养细胞或细胞裂解液中蛋白酶体复合物特有的胰凝乳蛋白酶样活性。该试剂盒使用LLVY-R110作为荧光底物，当底物被蛋白酶体切割后，会释放出强绿色荧光产物R110，其激发波长为480-500nm，发射波长为520-530nm。试剂盒提供所有必需组分及优化方案，检测结果稳定可靠，适用于高通量筛选，可评估培养细胞或溶液中的蛋白酶体活性或进行抑制剂筛选，操作兼容96孔和384孔荧光微孔板。

蛋白酶体的主要功能是通过蛋白水解作用降解不需要或受损的蛋白质。这一蛋白降解途径对细胞周期调控、基因表达调控和氧化应激反应等关键细胞过程至关重要。最常见的26S蛋白酶体是一种ATP依赖的蛋白水解复合物，由一个20S核心颗粒（700kDa）和两个19S调节帽（700kDa）组成。其中20S核心颗粒包含三种主要蛋白水解活性：胰凝乳蛋白酶样、胰蛋白酶样和半胱天冬酶样活性，负责降解与细胞凋亡、DNA修复、内吞作用和细胞周期调控相关的关键蛋白。

适用仪器

检测方案

概述

用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

制备细胞加入等体积的蛋白酶体测定溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在37°C或室温下孵育至少1小时

检测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

蛋白酶体 LLVY-R110 底物原液 (400X)

将 25 µL DMSO（组分 C）添加到 Proteasome LLVY-R110 底物（组分 A）小瓶中，并充分混合以制备 400X Proteasome LLVY-R110 底物原液。

注：如一次用不完，请将配好的25ul蛋白酶体 LLVY-R110 底物原液 (400X)，等分为十份，即每份2.5ul，-20℃避光保存。避免使用时反复冻融。

工作溶液配制

将 25 μL 400X Proteasome LLVY-R110 底物储备液添加到 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，并充分混合，制成蛋白酶体工作溶液。

注意：此蛋白酶体工作溶液足以用于 1 个板。避光。

注：如一次用不完，工作液的配制为：取其中一份储备溶液与1ml缓冲液混合，即2.5ul储备液+1ml缓冲液。工作液现配现用，不建议长时间保存。

操作方案

1.用 PBS 或所需缓冲液中的 10 µL 10X 测试化合物（对于 96 孔板）或 5 µL 5X 测试化合物（对于 384 孔板）处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在 5% CO2、37°C​​ 培养箱中孵育所需的时间。

注：纯蛋白酶体或细胞裂解物可直接用于筛选蛋白酶体抑制剂。

3.添加 100 µL/孔（96 孔板）或 25 µL/孔（384 孔板）蛋白酶体工作溶液。

4.将板在 37°C 避光孵育至少 1 小时（2 小时至过夜）。

注意：每个细胞系应单独评估以确定合适孵育时间。

5.检测 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff = 515 nm）处的荧光强度（顶部读数）。

试剂应用文献