Amplite 荧光法肾素检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

在100μL反应体系中可检测低至1ng的肾素

适用范围

用于肾素检测

产品介绍

肾素（Renin）是肾素-血管紧张素系统（RAS）的关键酶，通过调节细胞外液容量和动脉血管收缩，参与血压及电解质平衡的调控。血管紧张素II可收缩血管升高血压，同时促进抗利尿激素（ADH）和醛固酮分泌，并刺激下丘脑触发口渴反射。RAS系统过度激活会导致血管收缩及钠水潴留，因此肾素已成为高血压治疗的重要靶点。

Amplite 荧光法肾素检测试剂盒 红色荧光 采用专有的Tide Fluor™ 3（TF3）/Tide Quencher™ 3（TQ3）荧光共振能量转移（FRET）肽段，为肾素活性检测及抑制剂高通量筛选提供高效方案。其原理是：完整FRET肽中TF3荧光被TQ3淬灭，经肾素酶切后TF3荧光恢复，可通过荧光酶标仪直接检测。

Amplite 荧光法肾素检测试剂盒检测灵敏度较传统EDANS/DABCYL体系提高约50倍，在100μL反应体系中可检测低至1ng的肾素。试剂盒所用底物的选择性尚未完全验证，由于肽类蛋白酶底物普遍存在选择性局限，可能会对其他蛋白酶产生交叉反应。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.添加适当的对照或测试样品（50 µL）
2.加入Renin Red 底物工作溶液（50 µL）
3.在37°C的培养箱中孵育30-60分钟（用于终点读数）
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

肾素标准
向487.5 µL的测定缓冲液（组分C）中加入12.5 µL的40 µg / mL肾素标准溶液（组分B），得到1000 ng / mL的Renin标准溶液（Ren7）。 取150 µL 1000 ng / mL Renin标准溶液进行1：3连续稀释，以得到连续稀释的Renin标准液（Ren6- Ren1）。

2.工作溶液

将50μLRenin Red 底物（组分A）添加到5 mL的测定缓冲液（组分C）中，使总体积为5.05 mL。 注意：应立即使用Renin Red 底物。

样品操作及分析

表1.黑色96孔微孔板中肾素标准品和测试样品的布局。 Ren =肾素标准品（Ren1-Ren7，1至1000 ng / mL）; BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。 注意：肾素标准品仅用于阳性对照，不应作为酶活性的定量标准品

1.根据需要准备含有肾素的生物样品。

2.根据表1和表2中提供的布局准备肾素标准品和/或含肾素的测试样品。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

3.如果您正在筛选肾素抑制剂，则将板在酶反应所需的温度（例如25°C或37°C）下预孵育10-15分钟。

4.将50 µL（96孔）或25 µL（384孔）的Renin Red 底物工作溶液添加到样品和测定板的对照孔中。

5.将反应在37°C的培养箱中孵育30至60分钟。

6.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 mn）下监控荧光强度。

注意：试剂盒中使用的肾素底物的选择性尚未经过彻底测试。由于基于肽的蛋白酶底物通常具有低选择性，因此它也可能对其他蛋白酶有反应。人们可能使用肾素特异性抑制剂进行特异性测试，例如在存在肾素特异性抑制剂的情况下，底物的水解仅是由于非特异性蛋白酶活性。总活性和在肾素特异性抑制剂存在下的活性之间的差异给出了样品中的肾素活性。

对于动力学读数：立即开始测量荧光强度，并每5分钟连续记录数据30至60分钟。

对于终点读数：将反应液在37°C下孵育60分钟或更长时间，如果可能，请避免光照。 然后测量荧光强度。