Amplite 荧光法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

1.兼容96孔和384孔微孔板；

2.在100μL反应体系中，本试剂盒可检测低至0.15 mU/mL的黄嘌呤氧化酶活性。

适用范围

用于黄嘌呤氧化酶（XO）检测

产品介绍

黄嘌呤氧化酶（XO）是一种催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤，并能进一步将黄嘌呤氧化为尿酸的代谢酶，在嘌呤分解代谢过程中起关键作用。该酶通常存在于肝脏和空肠组织中，当肝脏严重受损时会释放入血，因此血液XO检测可作为肝损伤的诊断指标。黄嘌呤尿症是一种罕见遗传病，由于黄嘌呤氧化酶缺乏导致血液中黄嘌呤浓度异常升高，可能引发肾功能衰竭等健康问题。

Amplite®荧光法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒提供了一种快速、超灵敏的XO活性检测方案。该检测可在96孔或384孔微孔板中完成，无需分离步骤即可适配自动化操作。其检测原理是：黄嘌呤氧化酶催化嘌呤碱基（次黄嘌呤或黄嘌呤）氧化生成尿酸和超氧化物，后者自发降解为过氧化氢（H₂O₂）。试剂盒采用Amplite®Red荧光底物，支持荧光/吸光度双信号读取模式，可通过荧光酶标仪或吸光酶标仪进行检测。在100μL反应体系中，本试剂盒可检测低至0.15 mU/mL的黄嘌呤氧化酶活性。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.XO标准品或测试样品（50μL）
2.添加XO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育15-30分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。

注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH = 7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH = 7.4。

HRP库存解决方案（500X）：

将100μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.黄嘌呤氧化酶（XO）标准溶液（1 U / mL）
将200μL测定缓冲液（组分B）加入黄嘌呤氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。

2.标准溶液

XO标准
将10μL1U/ mL XO标准溶液加入990μL测定缓冲液（组分B）中以制备10mU / mL XO标准溶液（XO7）。 进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的XO标准品（XO6-XO1）。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备溶液（250X），10μLHRP储备溶液（500X）和50μL黄嘌呤（100X，组分D）加入5mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为 5.08mL黄嘌呤氧化酶（XO）工作溶液,避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中XO标准品和测试样品的布局

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局，将XO标准品（XO），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备成固体黑色96孔微孔板。对于384孔板，使用25μL 每孔试剂代替50μL。

2.向XO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLXO工作溶液，使总XO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLXO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm），截止= 570nm监测荧光强度。