Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒 生物发光法

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产品优势

采用"即混即读"检测方案，兼容高通量液体处理系统。

 

适用范围

用于碱性磷酸酶检测

 

产品介绍

碱性磷酸酶是一种高灵敏度酶制剂，广泛应用于ELISA、免疫组化以及Northern、Southern和Western blot等检测技术。该酶在多种生物检测（特别是免疫分析）和ELISA的诊断方法中具有重要作用。

Amplite®碱性磷酸酶检测试剂盒采用专用发光底物，可精准定量溶液及细胞裂解液中的碱性磷酸酶活性。该专利底物与磷酸酶反应后会产生强烈发光信号。试剂盒提供所有必需组分，采用"即混即读"检测方案，兼容高通量液体处理系统，具有高的检测灵敏度，可满足严苛的灵敏度要求。

 

适用仪器

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发光酶标仪
推荐孔板:	纯白色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.添加分析缓冲液（组分D）（50μL）
5.在室温下孵育10-30分钟
6.监测发光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1.1碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
将100μL含有0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水加入到碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位）的小瓶中，以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

 

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，在H2O-0.1％BSA中以1：100的比例获得10 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。 然后取10 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7），在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）。 注意：应废弃未使用的碱性磷酸酶标准品系列稀释液。

 

3.工作溶液

将磷酸酶底物（组分A）的全部内容物与反应缓冲液（组分B）混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。 避光。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

表1.固体白色96孔微孔板中碱性磷酸酶标准品和测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.01至10 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.01至10 mU / mL）
BL	50ul	H2O - 0.1% BSA
TS	50ul	测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

1.4将50μL测定缓冲液（组分D）加入碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，用测定反应混合物使总碱性磷酸酶测定体积为150μL/孔。对于384孔板，向每个孔中加入25μL测定缓冲液（组分D），总体积为75μL/孔。

1.5在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

1.6用标准发光板读数器监测发光增加。

 

2.在细胞中进行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。 注意：由于生长培养基与磷酸酶底物的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4将100μL（96孔板）或50μL（384孔板）的1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液加入细胞孔中。

2.5将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.6将50μL（96孔板）或25μL（384孔板）的测定缓冲液（组分D）加入含有工作溶液的细胞孔中。

2.7在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

2.8用标准发光板读数器监测发光增加。