Amplite 红色HRP荧光底物

产品货期

咨询

 

产品优势

几乎不会发生空气氧化，灵敏度高、稳定性好

 

适用范围

用于多种免疫检测中的HRP检测

可通过酶偶联反应检测多种氧化酶及相关酶/底物或辅因子的活性

 

产品介绍

Amplite® Red是一种高灵敏度的荧光过氧化物酶底物，可生成具有强红色荧光的产物，其最大吸收波长为571 nm，最大发射波长为585 nm。与二氢荧光素和二氢罗丹明等其他HRP底物不同，Amplite® Red几乎不会发生空气氧化。作为检测HRP和H₂O₂灵敏度高、稳定性好的荧光探针之一，Amplite® Red广泛应用于多种免疫检测中的HRP检测。

Amplite® Red还可用于痕量H₂O₂的检测。根据Amplite® Red的H₂O₂检测方法，其灵敏度较常用的东莨菪亭（scopoletin）检测法至少高出一个数量级。由于H₂O₂是多种酶促氧化还原反应的产物，Amplite® Red可通过酶偶联反应检测多种氧化酶及相关酶/底物或辅因子（如葡萄糖、乙酰胆碱、胆固醇、L-谷氨酸、氨基酸等）的活性。

 

适用仪器

---

荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em：	590nm
cutoff:	550nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案示例

概述

过氧化物酶（HRP）检测方案（适用于1块96孔黑板）

1.配制含200 µM H₂O₂的1X Amplite® Red工作液（磷酸盐缓冲体系，50 µL/孔）

2.加入过氧化物酶标准品或测试样品（50 µL/孔）

3.室温避光孵育10-30分钟

4.监测荧光强度（激发/发射波长=540/590 nm）

重要提示

本方案为溶液体系过氧化物酶检测的推荐流程，需根据实际需求调整

实验前需将所有试剂盒组分室温解冻

H₂O₂检测方案（适用于1块96孔黑板）

1.配制含0.4 U/mL过氧化物酶的1X Amplite® Red H₂O₂工作液（磷酸盐缓冲体系，50 µL/孔）

2.加入H₂O₂标准品或测试样品（50 µL/孔）

3.室温避光孵育10-30分钟

4.监测荧光强度（激发/发射波长=540/590 nm）

重要提示

本方案为溶液体系H₂O₂检测的推荐流程，需根据实际需求调整

实验前需将所有试剂盒组分室温解冻

储备液配制

（除非特别说明，所有储备液应分装为单次用量，-20°C保存，避免反复冻融）

Amplite® Red储备液（250X）

向试剂瓶中加入200 µL无水DMSO混匀。现配现用，剩余溶液需分装并于<-20°C避光保存。

注：避免反复冻融，含硫醇类物质（如DTT、β-巯基乙醇）会降低检测灵敏度。

工作液配制

1. 过氧化物酶检测工作液（1X）

取20 μL Amplite® Red储备液（250X）加入5 mL 50 mM磷酸盐缓冲液（pH 7.0，含200 μM H₂O₂）

2. H₂O₂检测工作液（1X）

取20 μL Amplite® Red储备液（250X）加入5 mL 50 mM磷酸盐缓冲液（pH 7.0，含0.4 U/mL过氧化物酶）

干扰提示

• 终浓度>10 μM的硫醇类物质（DTT、GSH等）会显著降低检测动态范围

• NADH可能干扰实验结果

实验操作流程

过氧化物酶检测

1. 每孔加入50 µL 1X Amplite® Red过氧化物酶工作液（384孔板改为25 µL/孔）

2. 室温避光反应10-30分钟

3. 荧光酶标仪读取Ex/Em=540/590 nm信号

4. 以仅含缓冲液的空白孔信号作为本底扣除

H₂O₂检测

1. 每孔加入50 µL 1X Amplite® Red H₂O₂工作液（384孔板改为25 µL/孔）

2. 室温避光反应10-30分钟

3. 荧光酶标仪读取Ex/Em=540/590 nm信号

4. 以仅含缓冲液的空白孔信号作为本底扣除