Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光**无铜*
| Ex (nm) | 656 | Em (nm) | 670 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
咨询
产品优势
1.比BrdU、EdU标记效率高
2.无铜检测技术，能够在单细胞水平精准测量活性DNA合成
适用范围
用于细胞增殖检测
产品介绍
细胞增殖监测是评估细胞活力、细胞周期及遗传毒性的重要手段，其核心检测原理在于测量细胞生长S期胸苷存在时的DNA合成情况。
Bucculite™ FdU 无铜细胞增殖荧光成像试剂盒采用胸苷类似物FOL-FdU，该物质在DNA合成过程中会被整合至细胞DNA链。细胞固定后，通过Buccutite™标记技术，将掺入的FOL-FdU与MTA-iFluor® 647进行特异性标记，最终形成的iFluor® 647标记DNA可通过Cy5通道进行荧光成像。
Bucculite FdU 无铜细胞增殖荧光成像试剂盒为抗BrdU抗体的检测方法和EdU点击化学反应提供了创新替代方案，是一种无铜检测技术，能够在单细胞水平精准测量活性DNA合成。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | 650 nm |
| Em： | 665 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备细胞（96 孔板每孔 100 µL，384 孔板每孔 25 µL）
2.加入 2 x浓度 FOL-FdU 工作液（96 孔板每孔 100 µL）
3.在37ºC下孵育3小时
4.移除培养基，用 100 µL 冰的 90% 甲醇 PBS 溶液在室温下固定细胞 15 分钟
5.除去固定液并用PBS洗涤3次
6.加入1X iFluor 647-MTA工作溶液（100 µL /孔）并在室温下染色30分钟。
7.除去每个孔中的工作溶液，并用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次。
8.每孔加入 100 µL 1X浓度洗涤缓冲液，在荧光显微镜下用 Cy5滤光片组观察
重要提示：使用前将所有组分在室温下解冻。
细胞制备
有关细胞样品制备的指导，请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
储备溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明，所有未使用的储备液应分装为单次使用量，制备后保存于-20°C，避免反复冻融。
FOL-FdU储备溶液（1000X）：
向FOL-FdU（组分A）中加入500 µL DMSO（组分E），配制1000X储备液
注：该1000X浓度经HeLa细胞优化确定。生长培养基、细胞密度、细胞类型差异等因素可能影响标记效果，建议测试不同FOL-FdU浓度以确定合适条件
iFluor 647-MTA储备溶液（400X）：
向iFluor™ 647-MTA（组分B）中加入50 µL DMSO（组分E），配制400X储备液
工作溶液配制
1. 2X FOL-FdU工作溶液
将 1000 X浓度 FOL-FdU 储备液在完全培养基中稀释 500 倍，制备 2 X浓度 FOL-FdU 工作液。
2. 1X iFluor™ 647-MTA工作液
取2.5 µL 400X iFluor™ 647-MTA储备液，加入1 mL染色缓冲液（组分C），制备1X iFluor 647-MTA工作液
3. 1X洗涤缓冲液：
取1 mL 10X洗涤缓冲液（组分D），加入9 mL PBS，制备1X Washing Buffer
操作步骤
1.细胞制备
贴壁细胞：在生长培养基中过夜铺板（96孔板每孔10,000-40,000细胞/100 µL；384孔板每孔2,500-10,000细胞/20 µL）
悬浮细胞：从培养基中离心收集细胞，重悬细胞沉淀至1-2×10⁶细胞/mL（每块96孔板需10 mL）
注：每种细胞系需单独评估确定合适细胞密度
2.FOL-FdU标记
向细胞培养基中等体积加入2X FOL-FdU工作液，使每孔终浓度为1X FOL-FdU溶液。不建议完全更换培养基，以免影响细胞增殖速率
在细胞合适培养条件下孵育3小时。FOL-FdU暴露时间可直接反映DNA合成活性，具体时间取决于细胞生长速率
3.细胞固定
孵育后，移出培养基，每个孔中加入100µL冰冷的90% 甲醇 PBS 溶液（未提供，甲醇/ PBS，v / v为90/10），在室温下孵育15分钟。
移除固定缓冲液，每孔用 PBS 洗涤细胞 2 次
4.细胞染色
向细胞板中加入 1 X iFluor™ 647-MTA 工作液（96 孔板每孔 100 µL，384 孔板每孔 50 µL）。在室温下避光孵育细胞 30 分钟。
移除每孔中的工作液。
用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次，洗涤后每孔加入100µL洗涤缓冲液。
注意：如果需要Hoechst 33342染色剂，请在1X洗涤缓冲液中制成5-10 µg / ml Hoechst 33342溶液并染色30分钟。
使用荧光显微镜，通过 Cy5滤光片组观察细胞中的荧光信号
