钙离子荧光探针Cal500 AM

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产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子测量对众多生物学研究至关重要。能与钙离子结合并产生光谱响应的荧光探针，使得科研人员能够利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等技术研究细胞内游离钙浓度的变化。Cal-500™是一种紫外激发的钙离子荧光探针，其最大发射波长约为500 nm，斯托克斯位移超过100 nm。该探针也可被405 nm紫色激光有效激发，对钙离子具有中等亲和力（Kd值约303 nM）。在CHO和HEK细胞中，Cal-500™ AM酯展现出优异的细胞内钙响应性能。

Cal-500的激发光谱与FITC、Alexa Fluor® 488及绿色荧光蛋白（GFP）有效分离，使其成为与GFP细胞系、FITC/Alexa Fluor® 488标记抗体或其他红色荧光探针进行多重细胞内检测的理想钙探针。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

Cal-500® AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的Cal-500® AM储备液。

注意：Cal-500® AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

Cal-500® AM 工作溶液

实验当天，将Cal-500® AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的Cal-500® AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Cal-500® AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X Cal-500® AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备DAPI滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 400/500 nm，截止波长470nm检测荧光信号