钙离子荧光探针Cal590AM

产品货期

现货

产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子测量对众多生物学研究至关重要。能对钙结合产生光谱响应的荧光探针使研究人员得以通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光谱仪和荧光酶标仪等技术检测细胞内游离钙离子浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2是目前最常用的探针。但Rhod-2 AM酯酶水解后在活细胞中的荧光强度较弱，且钙响应信号变化微弱。

Cal-590™的开发正是为了在保持与Rhod-2相同光谱波长（可兼容TRITC/Cy3®滤光片系统）的同时，显著改善细胞加载效率和钙响应灵敏度。在CHO和HEK细胞中，Cal-590™ AM的钙响应灵敏度远超Rhod-2 AM。其发射光谱与FITC、Alexa Fluor® 488及GFP能实现良好区分，因此成为GFP细胞系或FITC/Alexa Fluor® 488标记抗体多重细胞内检测的理想钙探针。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

Cal-590® AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的Cal-590® AM储备液。

注意：Cal-590® AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

Cal-590® AM 工作溶液

实验当天，将Cal-590® AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的Cal-590® AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Cal-590® AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X Cal-590® AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备TRITC/CY3滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 540/590 nm cutoff 570 nm检测荧光信号

试剂应用文献