钙离子荧光探针Cal630AM

产品货期

现货

产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子检测在生物医学研究中至关重要。通过特异性结合钙离子产生光谱响应的荧光探针，研究人员可利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光谱仪和酶标仪等设备监测细胞内游离钙离子浓度的动态变化。x-Rhod-1 是常用的红色荧光钙指示剂。然而，x-Rhod-1 在活细胞中经酯酶水解后，荧光强度中等，且对细胞内钙的响应非常微弱。

Cal-630探针，保留了x-Rhod-1光谱特性（兼容Texas Red®滤光片）的同时，改善了 x-Rhod-1 的细胞负载能力和对钙响应灵敏度。在 CHO 细胞和 HEK 细胞中，Cal-630™ AM 对细胞内钙的响应灵敏度远高于 x-Rhod-1。

Cal-630 的光谱与 FITC、Alexa Fluor® 488 和 GFP 的光谱能很好地分开，这使其成为与 GFP 细胞系或 FITC/Alexa Fluor® 488 标记抗体进行细胞内多重检测的理想钙探针。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

 Cal™ 630® AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的 Cal™ 630® AM储备液。

注意： Cal™ 630® AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

 Cal™ 630® AM 工作溶液

实验当天，将 Cal™ 630® AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的 Cal™ 630® AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强 Cal™ 630® AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X  Cal™ 630® AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备Texas Red滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 600/640 nm cutoff 630 nm检测荧光信号

试剂应用文献

Inspiration and inflammation in the breathing brainstem
Authors: Reising, Jan Philipp
Journal: (2024)