钙离子荧光探针CalGreen1AM

产品货期

咨询

产品优势  

低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

Cal Green™ 1（AAT Bioquest公司产品）与Invitrogen公司的Calcium Green-1实为同一化合物。这种细胞非通透性染料是一种488 nm激发的钙离子荧光指示剂，其特性在于与钙离子结合后荧光强度显著增强。相较于传统探针Fluo-3，Cal Green-1在低钙浓度条件下具有更强的荧光信号，这一特性使其具备两大突出优势：一方面可更准确地测定基础钙离子水平，另一方面显著提升了静息状态细胞的检测灵敏度，为细胞钙信号研究提供了更可靠的工具。

Cal Green™ 1（AAT Bioquest公司产品）与Invitrogen公司的Calcium Green-1实为同一化合物。其细胞膜通透性衍生物Cal Green 1 AM（Calcium Green-1 AM）是一种488 nm激发的钙离子荧光探针，与钙离子结合后荧光强度显著增强。相较于Fluo-3 AM，Cal Green-1 AM在细胞内低钙浓度条件下表现出更强的荧光信号，这一特性使其能够更精确地测定基础钙离子水平，并显著提升静息状态细胞的检测灵敏度。

Cal Green™ 1已广泛应用于多种钙信号研究领域，包括：细胞内钙离子浓度测定、钙内流与释放过程追踪，以及活体组织中钙信号的多光子激发成像等实验。使用方法简便，只需将溶解后的探针直接加入培养基中的培养细胞即可完成装载。检测时可采用荧光显微镜、微孔板荧光检测或流式细胞术等多种方法进行荧光信号采集。

适用仪器

溶解方案(溶剂以说明书为准)

样品实验方案

储备溶液配制:

除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分成一次性等份，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

Cal Green 1 AM 储备溶液

在高品质无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Cal Green 1 AM 储备溶液。

工作溶液配制:

Cal Green 1 AM 工作溶液

1.实验当天，将 Cal Green 1 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Cal Green 1 AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Cal Green  1 AM。细胞加载所需染料的准确浓度必须根据经验确定。

注意：1.非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 可增加 Cal Green™ 1 AM 的水溶性。可以从百萤购买各种 Pluronic® F-127

          2.如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后染料的外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将 AM 酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指导，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中将细胞孵育过夜。

2.第二天，将 1X Cal Green 1 AM 工作溶液添加到您的细胞培养板中。

3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。

4.用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

5.根据需要添加刺激剂，同时使用配备 FITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 490/525 nm 处测量荧光。