新型钙离子荧光探针Calbryte520L AM

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产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.多色兼容性：绿色荧光，适用于多通道成像

3.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

细胞内钙流检测作为监测信号转导通路及高通量筛选GPCR（G蛋白偶联受体）和钙通道靶标的核心技术，自1989年Fluo-3问世以来，相继开发的Fluo-4、Fluo-8和Cal-520系列探针凭借显著提升的信噪比，迅速成为共聚焦显微镜、流式细胞术和高通量筛选的首选钙指示剂。然而，Fluo-4仍存在明显局限：与Fluo-3类似，其胞内滞留性较差，必须使用丙磺舒（probenecid）来防止探针外泄，但该抑制剂本身具有多重复杂细胞效应，会干扰检测结果。

Calbryte 520L AM通过创新性突破解决了这一技术瓶颈——作为细胞膜穿透性荧光探针，进入细胞后，其疏水性封闭基团会被酯酶水解，形成带负电荷的荧光染料并保留于胞内，（无需丙磺舒）。该探针具有低钙亲和力特性（Kd≈91μM），能在高钙浓度环境下产生强荧光信号，其激发/发射波长与Fluo-4完全一致，可直接沿用Fluo-4的仪器参数设置，为钙信号研究提供了更可靠的检测方案。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

Calbryte520L AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的Calbryte520L AM储备液。

注意：Calbryte520L AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

Calbryte520L AM 工作溶液

实验当天，将Calbryte520L AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的Calbryte520L AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Calbryte520L AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X Calbryte520L AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备FITC滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 490/525 nm，截止波长515 nm检测荧光信号