钙黄绿素, AM CAS 148504-34-1

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产品优势  

细胞渗透性好：可自由穿透活细胞膜，经水解后生成强荧光

适用范围

用于检测细胞活力

产品介绍

Calcein AM 因其相较于calcein更强的疏水性，能够高效穿透活细胞膜。作为calcein的乙酰甲氧基（AM）衍生物，Calcein AM通过掩蔽分子中螯合钙离子的部分，成为广泛应用于活细胞标记的荧光探针。

当Calcein AM进入活细胞后，细胞内酯酶会水解去除其AM基团，使分子恢复钙离子结合能力（同时产生强绿色荧光），并被有效滞留在细胞内。由于死细胞缺乏酯酶活性，该探针可实现活细胞特异性标记。这一特性使其成为细胞活性检测和短期细胞标记的理想工具。

与其他活细胞标记试剂（如BCECF-AM和羧基荧光素二乙酸酯）相比，Calcein AM凭借其更低的细胞毒性，成为活细胞染色的理想选择。实验证实，该探针对淋巴细胞增殖、趋化等重要细胞功能均无显著影响。此外，基于Calcein的细胞活性检测结果可靠，与标准的51Cr释放法具有良好的一致性。

选择指南

操作步骤

储备溶液配制

所有未使用的储备溶液均应分装成单次使用量，并于-20°C保存（除非另有说明）。避免反复冻融。

Calcein AM储备液

使用优质无水DMSO配制2-5 mM的Calcein AM储备液。

注：可采用非离子型表面活性剂Pluronic® F-127提高AM酯的水溶性，染色缓冲液中Pluronic® F-127终浓度建议为0.02%（百萤生物提供多种Pluronic® F-127产品）。AM酯类试剂应避免与Pluronic® F-127长期共存。

工作液配制

Calcein AM工作液

选择合适缓冲液（如Hanks或Hepes缓冲液）配制1-10 µM工作液。多数细胞系推荐使用4-5 µM终浓度，具体浓度需通过实验优化。
注：若细胞存在有机阴离子转运体，可加入1-2.5 mM丙磺舒或0.1-0.25 mM苯磺唑酮以减少水解产物的外排。

实验操作流程

1.移除培养基，用无血清缓冲液洗涤细胞一次

2.加入Calcein AM工作液，37°C孵育30-60分钟

3.更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液

4.可选择以下任一检测方式检测荧光强度

配备FITC滤光片的荧光显微镜

配置蓝色激光器和5300/30 nm滤光片的流式细胞仪

 荧光酶标仪（激发/发射=490/525 nm，截止515 nm）

试剂应用文献