钙蓝素,AM CAS 168482-84-6
| Ex (nm) | 354 | Em (nm) | 441 |
| 分子量 | 465.41 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
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产品介绍
钙蓝素,AM是是钙黄绿素的细胞渗透型。进入活细胞后，弱荧光钙黄绿素AM被水解成钙黄绿素，其激发/发射大值与DAPI，Hoechst和AMCA相似。与典型的绿色和红色荧光团（如FITC，TMR和德克萨斯红）的这种特殊光谱分离为多路复用实验提供了额外的选择。因为钙黄绿素AM本身是荧光的，所以可能需要适当的过滤器组和额外的洗涤步骤以使背景荧光小化。我们的钙测定缓冲液可用于有效洗涤细胞外钙黄绿素。
选择指南
| Dye | Calcein Blue | CytoCalcein™ Violet 450 | Calcein UltraBlue™ | CytoCalcein™ Violet 500 | Calcein UltraGreen™ | Calcein | Calcein Orange™ | Calcein Red™ | Calcein Deep Red™ | |
| 原理 | 在活细胞中，非荧光钙黄绿素 AM 在细胞内酯酶的作用下 AM 酯水解后转化为荧光钙黄绿素产物。 | |||||||||
| 荧光效果 | 活细胞具有高度荧光，很容易与无荧光的死细胞区分开。 | |||||||||
| Laser(nm) | UV (350) | Violet (405) | UV (350) | Violet (405) | Blue (488) | Blue (488) | Green (532) | Yellow (561-568) | Red (633-647) | |
| Ex/Em(nm) | 354/441 | 406/445 | 359/458 | 420/505 | 492/514 | 501/521 | 531/545 | 562/576 | 643/663 | |
| 是否复用 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | |
| 染料相容性 | 与绿色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与绿色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与绿色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与蓝色和红色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与蓝色和绿色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | 与蓝色和绿色荧光蛋白、指示剂和其他探针兼容 | |
| 样品类型 | 活细胞 | |||||||||
| 适用仪器 | 荧光显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪 | |||||||||
| 货号 | 22007 | 22012 | 21908 | 22013 | 21905 | 22003 | 22009 | 21900 | 22011 | |
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 350 nm or 405 nm |
| Em： | 450/40 nm |
| 通道: | Pacific Blue 通道 |
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荧光显微镜 |
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| Ex: | DAPI 滤波片组 |
| Em： | DAPI 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
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荧光酶标仪 |
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| Ex: | 360 nm |
| Em： | 450 nm |
| Cutoff： | 420 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式： | 底读模式 |
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *储备液。
2.1卡介素蓝量，AM * CAS 168482-84-6 *使用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *与1074.32μL无水DMSO混合。
3.用含有10μM钙黄绿素的HHBS制备2X工作溶液，AM * CAS 168482-84-6 * 4，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1Calcein Blue的终孔内浓度，AM * CAS 168482-84-6 *：5μM
3.2Pluronic®F-127的终孔内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM Probenecid。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议终浓度为Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1此步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调整为以下：5μM钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，0.04％Pluronic®F-127,1 mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 360/445 nm运行实验。
