钙黄绿素红,AM

产品货期

咨询

产品优势  

1.多色标记兼容性：突破传统Calcein AM单色限制，发射光谱与GFP完全区分

2.细胞渗透性好：可自由穿透活细胞膜，经水解后生成强荧光

适用范围

用于检测细胞活力

产品介绍

Calcein AM是目前最常用的活细胞功能标记荧光探针之一。然而，其单一荧光特性使其无法应用于多色标记实验体系。例如，由于与GFP荧光信号重叠，Calcein AM无法与GFP转染细胞配合使用。

为突破Calcein AM的这一应用局限，我们成功研发了Calcein Orange™、Calcein Red™和Calcein Deep Red™系列新型探针。这些Calcein AM类似物可与传统Calcein AM联用，实现活细胞的多色标记与功能分析。其中，非荧光性的Calcein Red™ AM可自由穿透活细胞膜，经水解后生成强荧光Calcein Red™染料，其信号可通过常规TRITC/Cy3滤光片组进行检测。

AAT Bioquest同时提供Calcein Red™标准品作为Calcein Red™ AM的参照染料。

选择指南

操作步骤

储备溶液配制

所有未使用的储备溶液均应分装成单次使用量，并于-20°C保存（除非另有说明）。避免反复冻融。

Calcein Red™ AM储备液

使用优质无水DMSO配制2-5 mM的Calcein Red™ AM储备液。

注：可采用非离子型表面活性剂Pluronic® F-127提高AM酯的水溶性，染色缓冲液中Pluronic® F-127终浓度建议为0.02%（百萤生物提供多种Pluronic® F-127产品）。AM酯类试剂应避免与Pluronic® F-127长期共存。

工作液配制

Calcein Red™ AM工作液

选择合适缓冲液（如Hanks或Hepes缓冲液）配制1-10 µM工作液。多数细胞系推荐使用4-5 µM终浓度，具体浓度需通过实验优化。
注：若细胞存在有机阴离子转运体，可加入1-2.5 mM丙磺舒或0.1-0.25 mM苯磺唑酮以减少水解产物的外排。

实验操作流程

1.移除培养基，用无血清缓冲液洗涤细胞一次

2.加入Calcein Red™ AM工作液，37°C孵育30-60分钟

3.更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液

4.可选择以下任一检测方式检测荧光强度

配备TRITC滤光片的荧光显微镜

配置绿/黄激光器和585/40 nm滤光片的流式细胞仪

 荧光酶标仪（激发/发射=540/590 nm，截止570 nm）

试剂应用文献