酪朊酸,FITC标记
英文名称：Casein, FITC-conjugated
产品参数
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | Water |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品概述
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适用范围
用于蛋白酶活性的荧光法检测
产品介绍
酪蛋白被公认为广谱蛋白酶的通用底物。这种荧光标记酪蛋白与天然酪蛋白一样，可被多种蛋白酶水解，广泛用于蛋白酶活性的荧光法检测。在该完整底物中，酪蛋白被5-FITC重度标记，导致显著的荧光猝灭效应。蛋白酶催化水解可解除猝灭作用，产生亮绿色荧光的染料标记短肽。荧光强度的增加与蛋白酶活性成正比。
我们不建议将该偶联物用于荧光偏振检测。如需进行荧光偏振实验，我们可定制轻标记荧光素酪蛋白偶联物。
实验方案
样品实验方案
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融。
酪蛋白，FITC偶联原液：
在PBS缓冲液中制成5-10 mg / mL酪蛋白，FITC偶联的原液。
2.工作溶液
酪蛋白FITC共轭工作溶液（2X）：
将FITC偶联的原液以100-400μg/ mL的浓度稀释至50-100 mM Tris缓冲液（pH 7.4）中。 2X Assay工作溶液设计用于检测胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。
对于其他蛋白酶，请参考表1中合适的测定缓冲液配方。
对于每种蛋白酶，应通过实验确定测定工作溶液的合适浓度。
样品操作及分析
1.将等体积的胰蛋白酶标准品或样品与2X Assay工作溶液混合。
2.在Ex / Em = 490/525 nm处监控荧光的增加。
2.1 对于动力学读数：立即开始连续连续测量荧光强度，并每5分钟记录一次数据，持续30分钟。
2.2 对于终点读数：在避光的条件下，将反应在所需温度下孵育30至60分钟。 然后测量荧光强度。
表1.测定工作溶液的适当测定缓冲液配方
| 蛋白酶 | 1x 分析缓冲液 |
| 组织蛋白酶D | 20 mM柠檬酸钠，pH 3.0 |
| 木瓜蛋白酶 | 20 mM乙酸钠，20 mM半胱氨酸，2 mM EDTA，pH 6.5 |
| PAE | 20 mM磷酸钠，pH 8.0 |
| 胃蛋白酶 | 10 mM HCl，pH 2.0 |
| 猪胰弹性蛋白酶 | 10 mM Tris-HCl，pH 8.8 |
| 枯草杆菌 | 20 mM磷酸钾缓冲液，pH 7.6，150 mM NaCl |
试剂应用文献
Mutations in ClpC1 or ClpX subunit of caseinolytic protease confer resistance to ilamycins in mycobacteria
Authors:
Gao, Yamin and Fang, Cuiting and Zhou, Biao and Hameed, HM Adnan and Sun, Changli and Tian, Xirong and He, Jing and Han, Xingli and Zhang, Han and Li, Jun and others,
Journal:
Communications Biology (2025): 1219
Development of novel imipridone derivatives with potent anti-cancer activities as human caseinolytic peptidase P (hClpP) activators
Authors:
Zhang, Yanzhi and Jiang, Jinxin and Ding, Hao and Li, Qiannan and Xiao, Yibei and Sun, Haiying
Journal:
Bioorganic Chemistry (2024): 107765
