酪朊酸,TAMRA标记

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适用范围

用于蛋白酶活性的荧光法检测

产品介绍

酪蛋白被公认为广谱蛋白酶的通用底物。这种罗丹明标记酪蛋白与天然酪蛋白一样，可被多种蛋白酶水解，广泛用于蛋白酶活性的荧光法检测。在该完整底物中，酪蛋白被TAMRA重度标记，导致显著的荧光猝灭效应。蛋白酶催化水解可解除猝灭作用，产生亮橙色荧光的染料标记短肽。荧光强度的增加与蛋白酶活性成正比。

与FITC标记酪蛋白相比，该底物具有pH无关的荧光特性，这一特点更适用于需要低pH条件的检测实验。我们不建议将该偶联物用于荧光偏振检测。如需进行荧光偏振实验，我们可定制轻标记荧光素酪蛋白偶联物。

样品实验方案 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
酪蛋白，TAMRA共轭原液：
在PBS缓冲液中制成5-10 mg / mL酪蛋白，TAMRA偶联的原液。 注意：未使用的储备溶液可分为一次性使用的等分试样，并在-20 ℃下保存，并避免暴露在光线下。

2.工作溶液

酪蛋白TAMRA共轭的工作溶液（2X）：
将TAMRA共轭的原液以100-400μg/ mL的浓度稀释至50-100 mM Tris缓冲液（pH 7.4）中。 2X Assay工作溶液设计用于检测胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。

对于其他蛋白酶，请参考表1中合适的测定缓冲液配方。

对于每种蛋白酶，应通过实验确定测定工作溶液的最佳浓度。

样品操作及分析

1.将等体积的胰蛋白酶标准品或样品与2X Assay工作溶液混合。

2.在Ex / Em = 490/525 nm处监控荧光的增加。

2.1 对于动力学读数：立即开始连续连续测量荧光强度，并每5分钟记录一次数据，持续30分钟。

2.2 对于终点读数：在避光的条件下，将反应在所需温度下孵育30至60分钟。 然后测量荧光强度。

表1.测定工作溶液的适当测定缓冲液配方