Cell Meter 2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒

样品实验方案

简要概述

1.用您的测试化合物准备细胞

2.加入2-NBDG染色溶液

3.将细胞在37ºC孵育20分钟

4.去除2-NBDG染色溶液

5.用测定缓冲液I洗涤细胞

6.使用530/30 nm滤光片（FITC通道）的荧光显微镜或流式细胞仪分析

工作溶液配制

将5 µL 2-NBDG（10 mg/mL，组分A）加入1.5 mL检测缓冲液I（组分B）中混匀，配制成2-NBDG染色工作液。注意避光。

 注意：该2-NBDG染色溶液在室温下稳定1小时。

           不同细胞系的最佳染色条件需优化（建议预实验确定组分A浓度）

细胞样本制备指南：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

操作步骤

1.将测试化合物加入细胞，置于37℃、5% CO₂培养箱孵育（建议24/48/96小时）。空白孔（无细胞培养基）加入等量缓冲液对照。

注意：应根据每个细胞系的具体情况进行评估，以确定最佳细胞密度和孵育时间。我们将 CHO-K1 细胞与 20 mM 葡萄糖孵育，用于葡萄糖竞争试验；将 100 µM 根皮素孵育，用于葡萄糖转运蛋白 (GLUTs) 抑制试验。详情请参阅数据分析。

2.处理结束后，在实验开始前，以 800 rpm 的转速离心 5 分钟（关闭制动）。

3.在不干扰细胞的情况下吸出上清液。

4.加入2-NBDG染色工作液：96孔板：每孔加入100 μL；384孔板：每孔加入25 μL

注意：合适的孵育时间需根据具体细胞系和实验条件进行优化。本实验以CHO-K1细胞为例，使用100 μM 2-NBDG（约34 μg/mL）在37℃条件下孵育20分钟，可获得理想的葡萄糖摄取效果。具体数据分析请参考相关说明。*

5.在孵育结束时，将培养板以800rpm离心5分钟。

6.小心吸弃2-NBDG染色液，避免扰动细胞

7.荧光显微镜检测方案：

使用检测缓冲液I（组分B）洗涤细胞1次

加入检测缓冲液II（组分C）：96孔板：每孔100 μL；384孔板：每孔25 μL

使用配备FITC滤光片的荧光显微镜检测荧光信号

流式细胞仪检测方案：

如需要消化细胞，可使用EDTA进行处理

将细胞重悬于检测缓冲液I（组分B）中，每样品100 μL

使用配备530/30 nm滤光片（FITC通道）的流式细胞仪检测荧光信号

试剂应用文献