Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

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产品优势

通过流式细胞仪或荧光显微镜同步检测凋亡细胞、坏死细胞、健康细胞

适用范围

用于细胞凋亡和细胞坏死检测

产品介绍

Cell Meter™细胞检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具，可通过多种参数进行检测。本试剂盒专为同步监测细胞凋亡、坏死及健康细胞状态而设计。

细胞凋亡是一种主动的、程序化的细胞自主解体过程，其特点是不引发炎症反应。在凋亡过程中，磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）会外翻至细胞膜外侧。作为细胞凋亡早期/中期阶段的通用标志物，PS的膜外暴露甚至可早于细胞形态学变化被检测到。Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒采用的PS探针在与膜表面PS结合后会发出绿色荧光。

细胞坏死则是一种被动的、由环境扰动导致的意外性细胞死亡，伴随炎症性细胞内容物的失控释放。通过膜不通透性染料7-AAD（激发/发射波长=546/647 nm）对细胞核的标记，可直观反映细胞膜完整性的丧失——这一特征标志着晚期凋亡与坏死状态

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒还提供活细胞胞质标记染料CytoCalcein™ Violet 450（激发/发射波长=405/450 nm），用于标记存活细胞的细胞质。经优化设计，该试剂盒可通过流式细胞仪或荧光显微镜同步检测：

凋亡细胞（绿色）

坏死细胞（绿色和/或红色）

健康细胞（蓝色）

样品分析方案

概述

制备含测试化合物的细胞样本（200 µL/样本）

加入Apopxin Green测定溶液

在室温下孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

凋亡细胞：530/30 nm发射滤光片（FITC通道）

健康细胞：450/40 nm发射滤光片（Pacific Blue通道）

坏死细胞：670/14 nm发射滤光片（PE-Cy5通道）

工作溶液配制

除非另有说明，所有未使用的母液应分装为单次使用量，配制后保存于-20°C，避免反复冻融。

CytoCalcein™ Violet 450工作液（200X）

向CytoCalcein™ Violet 450（组分D）管中加入100 µL DMSO，配制成200X工作液，避光保存。

细胞样本制备详细指南请参考https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

实验操作流程

Apopxin Green细胞标记与孵育步骤

1.使用测试化合物处理细胞至所需时间（如：Jurkat细胞经星形孢菌素处理4-6小时）

2.离心收集细胞，调整密度1-5×105个细胞/管。

3.使用200 µL Assay Buffer（组分B）重悬细胞

4.加入2 µL 100X Apopxin™ Green（组分A）

可选步骤1：检测坏死细胞时，加入1 µL 200X 7-AAD（组分C）

可选步骤2：检测健康细胞时，加入1 µL 200X CytoCalcein™ Violet 450工作液

5.室温避光孵育30至60分钟

6.加入300 µL Assay Buffer（组分B）以调整样本体积

7使用流式细胞仪或荧光显微镜分析

凋亡细胞：530/30 nm发射滤光片（FITC通道）

健康细胞：450/40 nm发射滤光片（Pacific Blue通道）

坏死细胞：670/14 nm发射滤光片（PE-Cy5通道）

流式细胞仪分析：

使用配备530/30 nm（FITC通道-凋亡细胞）、450/40 nm（Pacific Blue通道-健康细胞）和670/14 nm（PE-Cy5通道-坏死细胞）发射滤光片的流式细胞仪定量检测Apopxin™ Green结合情况。

注：由于细胞解离或收集过程中可能造成特异性膜损伤，Apopxin™在贴壁细胞中的流式细胞分析尚未作为常规检测项目。但Casiola-Rosen等和van Engelend等研究者此前已报道过贴壁细胞Annexin V的流式检测方法。

荧光显微镜分析：
孵育完成后，吸取细胞悬液，用Assay Buffer洗涤1-2次，随后用Assay Buffer重悬细胞。将细胞滴加至盖玻片或黑色壁/透明底96孔板中。

注：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片（或黑色壁/透明底96孔板）上培养细胞。与Apopxin™ Green共孵育后，用Assay Buffer洗涤1-2次，再加入Assay Buffer覆盖盖玻片（或96孔板）。将盖玻片倒置于载玻片上观察细胞。也可在Apopxin™ Green孵育后用2%甲醛固定细胞，再进行显微镜观察。

使用荧光显微镜FITC滤光片观察Apopxin™ Green标记的凋亡细胞。当加入7-AAD时，采用Texas Red滤光片检测细胞活力；  加入CytoCalcein™ Violet 450时，则使用DAPI或紫光滤光片。细胞膜表面的绿色荧光表明Apopxin™ Green与细胞膜表面磷脂酰丝氨酸（PS）的结合。

试剂应用文献