Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

可直接检测贴壁和悬浮细胞自噬过程

适用范围

用于细胞自噬检测

产品介绍

自噬是一种进化保守的降解过程，通过溶酶体途径选择性清除长寿命蛋白质、细胞器及胞质成分，与主要降解短寿命蛋白的泛素-蛋白酶体系统形成功能互补。该通路在细胞饥饿存活、胞内成分清除、发育调控及免疫防御中发挥关键作用，并在稳态下执行"分子管家"功能，清除受损组分以维持细胞稳态。自噬异常与神经退行性疾病（如亨廷顿病、阿尔茨海默病、帕金森病）密切相关，在肿瘤发展中呈现双重作用：Beclin-1等自噬蛋白缺失会促进肿瘤发生，但其过表达可抑制癌细胞生长；同时自噬对实体瘤缺氧缺营养核心区的癌细胞存活至关重要。

Cell Meter™细胞自噬检测试剂盒采用特异性自噬体标记物Autophagy Green™来检测自噬活性。该试剂盒经过优化，可直接检测贴壁和悬浮细胞的自噬过程，提供完整的检测所需组分，适用于荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪等多种检测平台。Autophagy Green™具有较大的斯托克斯位移，检测灵敏度高。

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞，调整密度为1 - 2×10⁴个细胞/孔

2.加入Autophagy Green 工作溶液

3.在37°C孵育15-60分钟

4.用洗涤缓冲液洗涤细胞

5.使用荧光酶标仪（激发/发射波长=485/530 nm，截止波长515 nm）、配备FITC滤光片组的荧光显微镜，或配置530/30 nm滤光片（FITC通道）的流式细胞仪检测荧光强度。

工作溶液配制

将20 μL 500X Autophagy Green™（组分A）加入10 mL染色缓冲液（组分B）中混匀，配制成Autophagy Green™工作液。注意避光保存。

注意：20 μL 500X Autophagy Green™（组分A）可满足一个96孔板实验需求

细胞样本制备指南详见：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

操作步骤

1.根据自噬诱导方案，将细胞培养至合适密度（96孔板每孔约1-2×10⁴个细胞）,同时设置未诱导的阴性对照组，保持相同细胞密度

2.去除培养基

3.向每个孔中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Autophagy Green工作溶液。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育15至60分钟。

注意：适当孵育时间需根据细胞类型和浓度进行优化

5.用洗涤缓冲液（组分C）洗涤细胞3-4次，然后向每个孔中加入100μL洗涤缓冲液（组分C）。

注意：若染色效果不佳，可适当提高染料浓度或延长孵育时间

6.使用荧光酶标仪（激发/发射波长=485/530 nm，截止波长515 nm）、配备FITC滤光片组的荧光显微镜，或配置530/30 nm滤光片（FITC通道）的流式细胞仪检测荧光强度。

试剂应用文献