Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光
| Ex (nm) | 341 | Em (nm) | 441 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
稳定性好，可轻松适配高通量检测
适用范围
用于监测细胞凋亡
产品介绍
Cell Meter™检测试剂盒是一套用于监测细胞活性的工具。细胞活性可通过多种参数进行监测，本试剂盒专门通过检测Caspase 3活化来监测细胞凋亡。由于Caspase 3（CPP32/apopain）的激活对细胞凋亡的启动至关重要，它已被公认为细胞凋亡的可靠标志物。Caspase 3对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。本试剂盒采用Ac-DEVD-AMC作为Caspase 3活性的荧光指示剂，当Caspase 3切割AMC肽时会释放强荧光物质AMC，其荧光信号在340-370 nm激发光下于450-480 nm处进行检测。
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒提供所有必需组分及优化后的检测方案，方法稳定可靠，可轻松适配高通量检测：96孔板：每孔100 μL，可完成200次检测；384孔板：每孔25 μL，则可完成800次检测。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 360 nm |
| Em： | 470 nm |
| Cutoff： | 420 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 顶/底读模式 |
样品实验方案
简要概述
- 用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
- 加入等体积的Caspase 3/7底物工作溶液
- 在室温下孵育1小时
- 检测Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）的荧光强度
溶液配制
工作溶液配制
将50 µL Caspase 3/7底物（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。
注意：将未使用的组分A和B分装并存储在-20℃下。 避免反复冻融。
实验步骤
1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。
2.将细胞板在37°C，5％CO2培养箱中孵育（对于喜树碱处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导凋亡。
3.加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Caspase 3/7底物工作溶液。
4.在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。
注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。
5.以800 rpm的速度离心细胞板（特别是悬浮细胞）2分钟（制动）。
6.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）处检测荧光强度。
