Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

稳定性好，可轻松适配高通量检测

适用范围

用于监测细胞凋亡

产品介绍

Cell Meter™细胞凋亡检测试剂盒是一套用于监测细胞活性的工具。监测细胞活性可采用多种参数指标，本试剂盒通过特异性检测Caspase 3活化来监测细胞凋亡过程。作为细胞凋亡启动的关键蛋白酶，Caspase 3（CPP32/apopain）因其高度特异性而被学界公认为可靠的凋亡标志物——该酶能特异性识别并切割Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）肽段序列。

本试剂盒采用Z-DEVD-Rh 110-DVED-Z作为Caspase 3活性的荧光指示剂：当Caspase 3酶切Rh 110标记的肽段后，会释放出强荧光基团Rh 110，其荧光信号在480-500 nm激发光下，于520-530 nm发射波长处进行检测。试剂盒提供所有必需组分及经过优化的检测方案，具有优异的检测稳定性，并可轻松适配高通量筛选：96孔板规格：每孔100 μL试剂，可完成200次检测；384孔板规格：每孔25 μL试剂，可完成800次检测。

样本实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光强度（截止= 515 nm）

工作溶液配制

将 50 µL Caspase 3/7 底物（组分 A）添加到 10 mL 测定缓冲液（组分 B）中，并充分混合，制成 Caspase 3/7 底物工作溶液。

注意：将未使用的 Caspase 3/7 底物（组分 A）和测定缓冲液（组分 B）等分并储存在 -20 ℃ 下。避免反复冻融

细胞制备

1.对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中过夜，96 孔板为 20,000 个细胞/孔/90 uL，384 孔板为 5,000 个细胞/孔/20 mL。

2.对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮在培养基中，对于 96 孔聚 D 赖氨酸板，细胞沉淀为 80,000 个细胞/孔/90 uL，对于 96 孔聚 D 赖氨酸板，细胞沉淀为 20,000 个细胞/孔/20 uL 384 孔聚 D 赖氨酸板。实验前关闭刹车，将板以 800 rpm 离心 2 分钟。

 注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

操作

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37℃，5％CO₂，培养箱中孵育所需的一段时间（对于用喜树碱处理的Jurkat细胞，4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7工作溶液。

4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。

注意：如果需要，在室温下加入Caspase 3/7工作溶液10分钟后，将1μL1mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂加入到选定的样品中，确认抑制半胱天冬酶3/7样活动。

5.以800rpm离心细胞板（特别是对于悬浮细胞）2分钟（制动关闭）。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光强度。