Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

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产品优势

15分钟内即可与活化caspases发生反应

绿色荧光标记便于流式细胞术直接检测

结合后虽抑制caspases催化活性但不影响凋亡进程

适用范围

用于监测Caspase 3/7活性细胞凋亡

产品介绍

Cell Meter™细胞凋亡检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。监测细胞活力可采用多种参数指标，本试剂盒通过检测活细胞中通用的胱天蛋白酶3/7（caspase 3/7）激活情况来监测细胞凋亡进程。胱天蛋白酶3/7的激活已被广泛认可为细胞凋亡的可靠标志物。这类蛋白酶对天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸（DEVD）肽序列具有底物选择性。

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒采用TF2-DEVD-FMK作为胱天蛋白酶3/7活性的荧光指示剂。该指示剂具有细胞膜渗透性、无毒特性，并能与凋亡细胞中激活的胱天蛋白酶3/7不可逆结合。一旦与胱天蛋白酶结合，绿色荧光试剂将被保留在细胞内。这种结合会阻止胱天蛋白酶继续进行催化作用，但不会中断细胞凋亡进程。试剂加入培养基后15分钟内即可开始与活化的胱天蛋白酶发生反应。

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒提供所有必需组分及优化后的检测方案，适用于定量检测凋亡细胞中大多数激活的胱天蛋白酶活性，或用于筛选胱天蛋白酶抑制剂。其绿色荧光标记特性支持通过流式细胞术直接检测凋亡细胞中激活的胱天蛋白酶。

样品实验方案

简要概述

调整细胞密度至5×10⁵-1×10⁶个细胞/mL

将0.5 µL细胞溶液中加入1 µL 500X TF2-DEVD-FMK

将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育1-4小时

离心收集细胞并将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液或生长培养基中

流式细胞仪检测（FITC通道， 530/30 nm滤光片）

实验步骤

1.制备细胞悬液（0.5 mL/样本，密度5×10⁵-1×10⁶个细胞/mL）

注意：需根据细胞系优化凋亡诱导密度

2.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立阳性和阴性对照。

3.向处理过的细胞中加入1µL 500X TF2-DEVD-FMK（组分A）。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育1-4小时。

注意：贴壁细胞：需用0.5 mM EDTA温和消化，血清培养基洗涤后孵育
          孵育时间：根据细胞类型和浓度优化（1-4小时）

5.洗涤并离心细胞两次。将细胞重悬于0.5 mL分析缓冲液（组分B）或生长培养基中。

注意：TF2-DEVD-FMK是荧光的；因此，重要的是洗净任何未结合的试剂以除去背景。

6.如果需要，用 DNA 染料（例如碘化丙啶或7-AAD用于死细胞）标记细胞

7.如果需要，请固定细胞

8.使用530/30 nm滤光片（FITC通道）检测荧光强度，设门分析目标细胞群（排除碎片）

试剂应用文献