Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光
| Ex (nm) | 532 | Em (nm) | 619 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
稳定性好，可轻松适配高通量检测
适用范围
用于监测细胞凋亡
产品介绍
Cell Meter™细胞凋亡检测试剂盒是一套用于监测细胞活性的工具。监测细胞活性可采用多种参数指标，本试剂盒通过特异性检测Caspase 3活化来监测细胞凋亡过程。作为细胞凋亡启动的关键蛋白酶，Caspase 3（CPP32/apopain）因其高度特异性而被学界公认为可靠的凋亡标志物——该酶能特异性识别并切割Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）肽段序列。
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒采用Z-DEVD-ProRed™作为Caspase 3活性的荧光指示剂：当Caspase 3酶切ProRed™标记的DEVD封闭肽段后，会释放出强红色荧光基团ProRed™，其荧光信号在~530 nm激发光下，于~620 nm发射波长处进行检测。试剂盒提供所有必需组分及经过优化的检测方案，检测结果稳定可靠，并可轻松适配高通量筛选：96孔板规格：每孔100 μL试剂，可完成100次检测；384孔板规格：每孔25 μL试剂，可完成400次检测
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 620 nm |
| Cutoff： | 610 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 顶/底读模式 |
样本实验方案
简要概述
1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度（截止= 610 nm）
溶液配制
储备溶液配制
1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液（200X）：
将65 µL DMSO加到Z-DEVD-ProRed （组分A）的小瓶中，制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液，避光储存。
工作溶液配制
将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。
注意：分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液（来自步骤2.2）和测定缓冲液（组分B）。 避免反复冻融。
操作步骤
1.准备细胞：
1.1 对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔，或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔，过夜培养。
1.2 对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中，用于96孔；或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前，将板以800 rpm的速度离心2分钟。
注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的佳细胞密度。
2.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。
3.将细胞板在37°C，5％CO2的培养箱中孵育（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时）以诱导凋亡。
4.加入Caspase 3/7底物工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板。）
5.在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。
注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定的样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。
6.使用荧光酶标仪（Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm））监控荧光强度。
注意：有时，底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底部读取模式，则以800 rpm的速度离心细胞板（特别是悬浮细胞）2分钟（制动）。
