Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

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产品优势  

1.可轻松适配高通量筛选平台

2.既能定量检测凋亡细胞中caspase 8活化水平，也可筛选caspase 8抑制剂

 

适用范围

用于Caspase 8活性细胞凋亡检测

 

产品介绍

Cell Meter™检测试剂盒系列是用于监测细胞功能的专业工具组合，可通过多种参数检测细胞凋亡过程。本试剂盒通过特异性检测caspase 8酶活性来实现细胞凋亡监测。caspase 8是由CASP8基因编码的半胱氨酸蛋白酶，在亨廷顿病等神经退行性疾病中发挥重要作用。该酶对Ile-Glu-Thr-Asp（IETD）肽段序列具有特异性识别能力。

本试剂盒采用(Ac-IETD)-ProRed™作为荧光底物，当ProRed™肽段被caspase 8酶切后会产生强荧光信号。试剂盒提供全套优化组分和检测方案，可轻松适配高通量筛选平台，既可用于定量检测凋亡细胞中caspase 8活化水平，也可用于caspase 8抑制剂的筛选。

 

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荧光酶标仪
Ex:	450 nm
Em：	620 nm
Cutoff：	610 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	顶/底读模式

样品实验方案

简要概述

1.96孔板：每孔加入100 µL含待测化合物的细胞悬液；384孔板：每孔加入25 µL含待测化合物的细胞悬液

2.96孔板：每孔加入等体积（100 µL）Caspase 8底物工作液；384孔板：每孔加入等体积（25 µL）Caspase 8底物工作液

3.在室温避光孵育30-60分钟

4.监测Ex / Em = 370/450 nm处的荧光增加（截止= 420 nm）

 

工作溶液配制

取50 µL Caspase 8底物（组分A）加入10 mL检测缓冲液（组分B）中，充分混匀配制成Caspase 8底物工作液。注意避光保存。

注意事项：1.Caspase 8底物工作液稳定性较差，请现配现用 

                2.未使用的Caspase 8底物（组分A）和检测缓冲液（组分B）需分装后-20℃保存，避免反复冻融

 

有关细胞样品制备的指南，请访问

https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

细胞制备步骤：

贴壁细胞

使用黑色壁/透明底培养板：

96孔板：每孔接种20,000个细胞于90 μL生长培养基中，过夜培养

384孔板：每孔接种5,000个细胞于20 μL生长培养基中，过夜培养

悬浮细胞

从培养基中离心收集细胞

重悬细胞沉淀于新鲜培养基中，调整密度至：96孔板：每孔80,000-200,000个细胞/90 μL；384孔板：每孔20,000-50,000个细胞/20 μL

实验前以800 rpm离心2分钟（关闭离心机刹车功能）

注意事项：不同细胞系需单独评估以确定最佳凋亡诱导密度。

 

操作步骤

1.96孔板：每孔加入10 µL 10X待测化合物溶液  ；384孔板：每孔加入5 µL 10X待测化合物溶液 ，用PBS或所需缓冲液配制。空白对照孔（无细胞培养基）：加入等量化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡

3.96孔板：每孔加入100 µL Caspase 8底物工作液；384孔板：每孔加入25 µL Caspase 8底物工作液。

4.将Caspase 8工作溶液板在室温避光孵育30至60分钟。

注意：如果需要，在加入底物工作液前10分钟，可向指定样品加入1 µL 1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制剂以验证酶活抑制效果。

5.800 rpm离心2分钟（非贴壁细胞需特别注意，关闭离心机刹车功能）

6.用荧光酶标仪在Ex / Em =540/620 nm（截止波长 = 610 nm）下监测荧光增加。