Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光

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产品优势  

1.可轻松适配高通量筛选平台

2.既能定量检测凋亡细胞中caspase 9活化水平，也可筛选caspase 9抑制剂

适用范围

用于Caspase 9活性细胞凋亡检测

产品介绍

Cell Meter™检测试剂盒系列是专为监测细胞功能开发的多功能工具集，其中本试剂盒通过特异性检测caspase 9酶活性来实现细胞凋亡监测。caspase 9作为CED-3蛋白酶亚家族成员，能够剪切caspase-3、-6和-7等下游效应分子从而启动凋亡级联反应，在中枢神经系统发育过程中发挥关键作用。该酶对LEHD肽段序列具有特异性识别能力。

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒采用Ac-LEHD-AMC荧光底物，当AMC基团被caspase 9酶切后将释放强荧光信号。试剂盒提供全套优化组分，检测体系稳定可靠且兼容高通量筛选平台，既可用于定量检测凋亡细胞中caspase 9活化水平，也可用于抑制剂筛选。目前已被众多实验室成功应用于高通量筛选研究。

样品实验方案

简要概述

1.96孔板：每孔加入100 µL含待测化合物的细胞悬液；384孔板：每孔加入25 µL含待测化合物的细胞悬液

2.96孔板：每孔加入等体积（100 µL）Caspase 9底物工作液；384孔板：每孔加入等体积（25 µL）Caspase 9底物工作液

3.在室温避光孵育30-60分钟

4.监测Ex / Em = 375/435 nm处的荧光增加（截止= 420 nm）

工作溶液配制

取50 µL Caspase 9底物（组分A）加入10 mL检测缓冲液（组分B）中，充分混匀配制成Caspase 9底物工作液。注意避光保存。

注意事项：1.Caspase 9底物工作液稳定性较差，请现配现用 

                2.未使用的Caspase 9底物（组分A）和检测缓冲液（组分B）需分装后-20℃保存，避免反复冻融

有关细胞样品制备的指南，请访问

https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

操作步骤

1.96孔板：每孔加入10 µL 10X待测化合物溶液  ；384孔板：每孔加入5 µL 10X待测化合物溶液 ，用PBS或所需缓冲液配制。空白对照孔（无细胞培养基）：加入等量化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡

3.96孔板：每孔加入100 µL Caspase 9底物工作液；384孔板：每孔加入25 µL Caspase 9底物工作液。

4.将Caspase 9工作溶液板在室温避光孵育30至60分钟。

注意：如果需要，在加入底物工作液前10分钟，可向指定样品加入1 µL 1 mM Ac-LEHD-CHO Caspase 9抑制剂以验证酶活抑制效果。

5.800 rpm离心2分钟（非贴壁细胞需特别注意，关闭离心机刹车功能）

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 375/ 435nm（截止= 420nm）下监测荧光增加。