Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒
| Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 515 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。
2.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载
适用范围
用于钙离子检测
产品介绍
Cell Meter™流式细胞钙检测试剂盒采用荧光检测技术，通过流式细胞仪实现细胞内钙离子流动的动态监测或终点检测。该试剂盒操作简便：将Calbryte™ 520 AM染料加载至目标细胞后，经洗涤步骤去除多余染料，加入钙流激动剂即可通过流式细胞仪进行动力学或终点模式检测。Calbryte™ 520 AM可被动扩散进入细胞，其疏水基团被胞内酯酶水解后形成带负电荷的活性染料，与钙离子结合后荧光信号显著增强。当表达特定GPCR的细胞受激动剂刺激时，受体激活引发的钙离子释放会大幅提升Calbryte™ 520的荧光强度。该试剂盒不仅适用于细胞钙流监测，还可用于钙信号的细胞分选实验。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 488 nm |
| Em： | 530/30 nm |
| 通道: | FITC通道 |
兼容仪器
FDSS、NOVOStar、FlexStation、ViewLux、IN Cell Analyzer、ArrayScan等高通量检测系统
样品实验方案
简要概述
1.在测定缓冲液中准备细胞
2.加入Calbryte 520 AM染料工作溶液（1 µL）
3.在37°C孵育30分钟
4.洗涤细胞
5.添加钙流刺激剂
6.使用流式细胞仪（530/30 nm滤光片，FITC通道）监测荧光强度
重要注意事项：实验前需将所有试剂组分室温解冻
溶液配制
除非另有说明，所有未使用的母液应分装后于-20°C保存，避免反复冻融。
储备溶液配制
Calbryte 520 AM储备溶液（500X）
在Calbryte 520 AM储备溶液（组分A）的小瓶中加入100 µL DMSO（需自备），充分混匀。
注意：1. 100 µL Calbryte 520 AM储备溶液可以进行100次测定。
2.未使用储备溶液需分装密封，-20°C避光保存，有效期＞1个月，避免反复冻融
实验步骤
1.去除细胞培养基，加入0.5 mL测定缓冲液。
注意： 贴壁细胞：4×10⁵-8×10⁵个/样本；悬浮细胞：1×10⁶-2×10⁶个/样本，具体密度需根据细胞类型优化。
2.将1µL Calbryte 520 AM储备溶液（500X）加到0.5 mL非标准或贴壁细胞的测定缓冲液（组分B）中。
注意：如果细胞（例如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，则可将丙磺舒（组分C）添加到染料工作溶液中（孔浓度将为0.125-1 mM），以减少染料的泄漏。
3.将细胞在37°C下孵育30分钟。
4.非贴壁细胞：将细胞离心并去除染料，用0.4 mL HHBS（组分D）冲悬。
贴壁细胞：使用0.5 mM EDTA轻轻地将细胞从板中提起并离心。用0.4 mL HHBS（组分D）重悬。
注意：要从板上分离贴壁细胞，也可使用胰酶等消化酶，但需确认不影响目标受体
5.用HHBS或所需的缓冲液制备5X刺激剂工作液。
6.加入100 µL激动剂前后，使用流式细胞仪（530/30 nm滤光片，FITC通道）检测
关键：需在加药后1分钟内开始检测，且所有样本需保持相同的加药-检测间隔时间
