Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测

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产品优势

与DAF-2 探针相比，Nitrixyte™探针具有更好的光稳定性和更强的细胞渗透性

适用范围

用于一氧化氮（NO）检测

产品介绍

一氧化氮（NO）是一种重要的生物调节因子，参与多种生理和病理过程。一氧化氮生成异常与多种免疫性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病及炎症性疾病相关。作为一种自由基，一氧化氮极易被氧化，在体内的浓度相对较低，这使得检测并阐明其在生物系统中的作用颇具挑战性。

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒为监测活细胞内的一氧化氮水平提供了灵敏的工具。本试剂盒采用 Nitrixyte™探针，该探针是检测和成像细胞内游离一氧化氮的优质试剂，可替代 DAF-2。与DAF-2 探针相比，Nitrixyte™探针具有更好的光稳定性和更强的细胞渗透性。

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒具体使用 Nitrixyte™ Orange 探针，它能与一氧化氮反应生成明亮的橙色荧光信号，其光谱特性与 Cy3® 和 TRITC 相似。Nitrixyte™ Orange 可轻松进入活细胞，其荧光信号可使用 Cy3® 或 TRITC 的滤光片组方便地监测。该试剂盒经过优化，适用于荧光成像和酶标仪检测。

样本实验方案

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和 Nitrixyte™ Orange 工作液在 37°C 下共同孵育所需时间

3.添加测定缓冲液II

4.监测荧光强度（底部读取模式），激发 / 发射波长 = 540/590 nm（截止波长 = 570 nm），或使用荧光显微镜的 TRITC 滤光片观察

工作液的制备

向 10 mL检测缓冲液 I（组分 B）中加入 20 uL 500 倍浓度的 Nitrixyte™ Orange 储备液（组分 A），充分混合，制成 Nitrixyte™ Orange 工作液。该 Nitrixyte™ Orange 工作液在室温下可稳定至少 2 小时。需避光保存。

注意：20 uL 500 倍浓度的 Nitrixyte™ Orange 储备液足够用于一块培养板。

有关细胞样品制备的指南，请访问：

https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

实验方案示例

1.为刺激内源性一氧化氮（NO）的产生，在细胞培养基或所选缓冲液（如 PBS 或 HHBS）中，向 96 孔板的每孔加入 10 uL 10 倍浓度的测试化合物，或向 384 孔板的每孔加入 5 uL 5 x浓度的测试化合物。对于对照孔（未处理细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

       注意：加入化合物前无需洗涤细胞。但如果测试化合物对血清敏感，可在加入化合物前吸去生长培养基和血清因子。吸去后，向 96 孔板每孔加入 90 uL、向 384 孔板每孔加入 20 uL 1 X浓度的汉克斯盐溶液和 20 mM Hepes 缓冲液（HHBS），或所选的其他缓冲液。此外，细胞也可在无血清培养基中培养

2.向细胞培养板的 96 孔板每孔加入 100 uL 、384 孔板每孔加入 25  uL Nitrixyte™ Orange 工作液。将细胞与测试化合物和 Nitrixyte™ Orange 工作液在 37°C 下共同孵育所需时间，期间避光。

       注意：不要移除测试化合物。对于 NONOate 阳性对照处理：将细胞与 Nitrixyte™ Orange 工作液在 37°C 下孵育 30 分钟。移除工作液后，将细胞与 1 mM 的 DEA/NONOate 在 37°C 下进一步孵育 30 分钟以产生一氧化氮。

       注：我们的实验中，将 Raw 264.7 细胞与 0.5 X浓度的 Nitrixyte™ Orange、20 ug / mL的脂多糖（LPS）以及 1 mM 的 L - 精氨酸（L-Arg）在细胞培养基中于 37°C 共同孵育 16 小时。

3.吸去每孔中的溶液。

4.向 96 孔板每孔加入 100 uL、向 384 孔板每孔加入 25 uL检测缓冲液 II（组分 C）。

       注意：加入检测缓冲液 II 前不要洗涤细胞。

5.使用酶标仪以底部读取模式在激发 / 发射波长 = 540/590 nm（截止波长 = 570 nm）处监测荧光增强情况，或使用荧光显微镜的 TRITC 滤光片拍摄图像