Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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适用范围
用于细胞pH监测
产品介绍
细胞内pH值的变化与多种生理和病理过程密切相关，包括细胞增殖、凋亡、受精、恶性肿瘤、多药耐药性、离子转运、溶酶体贮积症以及阿尔茨海默病等。Cell Meter™荧光法细胞内pH检测试剂盒采用AAT Bioquest公司独家研发的荧光指示剂，可精准测量细胞内pH值的相对变化。该试剂盒采用均质、动态的活细胞荧光检测法，提供标准操作流程和酸负载流程两种检测方案。
标准流程适用于检测因药物处理导致细胞内pH值降低的治疗靶点。而"酸负载"流程则专门用于监测由GPCR激活或生长因子活性引起的细胞代谢变化所导致的细胞内pH值升高。在"酸负载"流程中，待荧光pH染料加载至细胞后，立即以最小体积加入氯化铵溶液进行"酸负载"处理，随后以较大体积缓冲液（约4倍）加入激动剂。溶液体积的骤变会引发细胞内的氨（NH3）迅速外流，导致细胞内pH值急剧下降，荧光信号随之减弱。通过监测荧光信号的相对增强程度，即可量化评估激动剂对细胞内pH值恢复的调控作用。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490 nm |
| Em： | 535 nm |
| Cutoff： | 515 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 其他可用仪器 | |
| FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer |
实验方案概览
标准细胞加载流程（单块96孔板）
1. 制备细胞悬液于生长培养基中
2. 加入等体积RatioWorks™ BCFL, AM染料工作液
3. 37°C孵育1小时
4.以激发/发射波长=490/535 nm（截止波长515 nm）读取荧光值（化合物添加量为50 µL/孔）
（若采用比率法检测：同步读取500/530 nm和440/530 nm波长数据）
酸负载流程（一个96孔板）
1.制备细胞悬液于生长培养基中
2.吸除生长培养基
3.加入RatioWorks™ BCFL, AM染料工作液（50 µL/孔）
4. 37°C孵育1小时
5.加入220 mM NH4Cl溶液（5 µL/孔）
6.室温孵育15分钟
7.以激发/发射波长=490/535 nm（截止波长515 nm）读取荧光值（化合物添加量为200 µL/孔）
8.（若采用比率法检测：同步读取500/530 nm和440/530 nm波长数据）
重要提示：实验前需将所有试剂组分室温解冻
细胞制备指南详见：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
储备溶液配制
除非另有说明，所有未用完的库存溶液应在制备后分装成单次使用的小份并储存在-20 °C。避免反复冻融。
RatioWorks™ BCFL, AM储备液配制
向Component A瓶中加入200 µL DMSO，混匀配制成RatioWorks™ BCFL, AM储备液
注：20 µL储备液可满足1块板的标准细胞加载实验，10 µL可满足1块板的酸负载实验。密封避光保存于≤-20°C可稳定1个月
工作液配制
标准细胞加载（单块板）
将1 mL 10X Pluronic F127 Plus（Component B）加入9 mL HHBS（Component C）混匀，配制成1X检测缓冲液
（如需添加probenecid：将50 mM ReadiUse™ Probenecid（Component D）稀释至1-5 mM，CHO细胞推荐5 mM）
取20 µL储备液加入10 mL 1X检测缓冲液，混匀配制成染料工作液（室温稳定≥2小时）
酸负载（一个96孔板）
将1 mL 10X Pluronic F127 Plus加入4 mL HHBS混匀，配制成1X检测缓冲液
（如需添加probenecid：稀释至0.5-2.5 mM，CHO细胞推荐2.5 mM）
取10 µL储备液加入5 mL 1X检测缓冲液，混匀配制成染料工作液（室温稳定≥2小时）
样品实验方案
标准细胞加载的pH测试
1.向细胞板加入染料工作液（96孔板100 µL/孔，384孔板25 µL/孔）
（注：若待测化合物与血清存在干扰，需先用HHBS缓冲液替换生长培养基）
2.细胞培养箱孵育30分钟，转室温继续孵育30分钟
（注：若需37°C检测，无需室温孵育）
3.用HHBS或指定缓冲液制备化合物板
4.按设定波长读取荧光值（化合物添加量：96孔板50 µL/孔，384孔板25 µL/孔）
（注：建议在加药后3-5分钟内完成检测，方法开发阶段建议至少采集8分钟数据）
酸负载的pH测试
1.吸除细胞板中的生长培养基
2.加入染料工作液（50 µL/孔）
3.细胞培养箱孵育30分钟，转室温继续孵育30分钟
（注：若需37°C检测，无需室温孵育）
4.加入5 µL新鲜配制的220 mM NH4Cl（HHBS溶解），离心5秒后室温孵育15分钟
5.用HHBS或指定缓冲液制备化合物板
6.按设定波长读取荧光值（化合物添加量200 µL/孔）
（注：建议在加药后3-5分钟内完成检测，方法开发阶段建议至少采集8分钟数据）
