活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势  

1. 可在 1小时的孵育后检测活细胞内的 ROS ；

2.兼容96/384孔板和高通量液体处理系统；

3.无需洗涤步骤即可实现自动化操作；

4.支持荧光酶标仪和荧光显微镜双平台检测

适用范围

用于细胞内ROS检测

产品介绍

活性氧（ROS）是氧代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起关键作用。然而在氧化应激状态下，ROS水平会急剧升高，其过度积累将严重损伤细胞结构。研究表明，氧化应激与心血管疾病、糖尿病、骨质疏松、中风、炎症性疾病、多种神经退行性疾病及癌症的发生发展密切相关。通过精确测量ROS水平，可深入解析氧化应激调控细胞内信号通路的分子机制。

Cell Meter™荧光法ROS检测试剂盒采用专利ROS Green探针，能特异性定量活细胞内的活性氧。该探针具有细胞膜穿透性，与ROS反应后产生绿色荧光。试剂盒采用"即混即读"的优化设计，具备以下优势：(1)可在 1-2 小时的孵育后检测活细胞内的 ROS ；(2)兼容96/384孔板和高通量液体处理系统；(3)无需洗涤步骤即可实现自动化操作；(4)支持荧光酶标仪和荧光显微镜双平台检测。这种灵敏的一步法检测方案为氧化应激研究提供了高效工具。

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.加入Amplite ROS绿色工作溶液（96孔板：100μL/孔；384孔板：25μL/孔）

3.将细胞在37℃下染色60分钟

4.加入测试化合物诱导ROS产生

5.使用荧光酶标仪（底部读数模式，激发/发射=490/525 nm，截止波长515 nm）或配备FITC滤光片的荧光显微镜监测荧光增强

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。

Amplite ROS Green储备溶液（500X）：

将向Amplite™ ROS Green（组分A）中加入40 µL DMSO（组分C），混匀配制成500X储备溶液，避光保存。

注：20 µL储备溶液可满足1块板检测，储存时需密封管口。

工作溶液配制

将20 µL 500X Amplite™ ROS Green储备液加入10 mL检测缓冲液（组分B），混匀配制成工作液。

注意：此Amplite ROS Green工作溶液在室温下稳定至少2小时。

细胞样本制备指南

详见：www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

标准实验流程

1.向细胞培养板中加入Amplite™ ROS Green工作液：96孔板：每孔100 μL；384孔板：每孔25 μL

2.将细胞培养板置于5% CO₂、37℃培养箱中孵育60分钟

3.96孔板：每孔加入20 μL 11X浓度测试化合物（可用PBS或HHBS等缓冲液配制）；384孔板：每孔加入10 μL 6X浓度测试化合物；对照组：加入等体积化合物缓冲液

4.将细胞培养板在室温或37℃（5% CO₂环境）至少孵育15分钟，（如使用1 mM H₂O₂处理Hela细胞需30分钟）

5.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）监测荧光增加，或使用荧光显微镜FITC滤光器组观察细胞。

试剂应用文献