活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 适合于流式细胞仪

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.将细胞浓度调整为 0.5-1×10⁶细胞/ mL

2.向 0.5 mL细胞悬液中加入 1 uL 500 倍浓度的 Amplite™ ROS Green

3.在37℃下将细胞染色1小时

4.处理细胞以诱导活性氧（ROS）产生

5.使用流式细胞仪的 FL1 通道（Ex / Em = 490/520 nm)分析细胞

储备溶液配制

  除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。

Amplite ROS绿色储备溶液（500X）：

向 Amplite™ ROS Green（组分 A）的小瓶中加入 100 µL  DMSO（组分 C），充分混合，制成 500 倍浓度的 Amplite™ ROS Green 储备液。避光保存。

注意：储存时，将试管密封严实。

有关细胞样品制备的指南，请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

操作步骤

1.对于每个样品，在 0.5 mL检测缓冲液（组分 B）或所选缓冲液中制备细胞，浓度为 5×10⁵至 1×10⁶个细胞 / mL。

注意：应单独评估每种细胞系，以确定 ROS 诱导的合适细胞浓度。

2.将向 0.5 mL细胞悬液中加入 1 µL 500 倍浓度的 Amplite™ ROS Green 储备液。

3.在在 37°C 下孵育 1 小时。

注意：对于贴壁细胞，用 0.5 mM EDTA 轻轻吹打细胞，以保持细胞完整，并在与 Amplite™ ROS Green 孵育前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于细胞类型和所用测试化合物。为每个实验优化孵育时间。

4.通过加入 50 µL 11 倍浓度的测试化合物（溶于所需缓冲液，如 PBS 或 HBSS）处理细胞。对于对照孔（未处理细胞），加入相应量的缓冲液。

5.在 37°C 下孵育细胞一段所需时间以诱导 ROS 产生，过程中避光。

注意：我们用 100μM 的 TBHP（叔丁基过氧化氢）在 37°C 下处理 Jurkat 细胞 30 分钟以诱导 ROS 产生

6.使使用流式细胞仪的 FL1 通道（Ex / Em = 490/520 nm)检测荧光强度

试剂应用文献