活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 红色荧光

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.加入Amplite ROS  Red工作溶液（96孔板：100μL/孔；384孔板：25μL/孔）

3.将细胞在37℃下染色1小时

4.加入测试化合物诱导ROS产生

5.使用荧光酶标仪（底部读数模式，激发/发射波长=520/605 nm，截止波长590 nm）监测荧光强度变化，或通过配备相应滤光片组（激发/发射=520/605 nm，Texas Red滤光片）的荧光显微镜观察细胞。

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。

Amplite ROS Red储备溶液（500X）：

将向Amplite™ ROS Red（组分A）中加入40 µL DMSO（组分C），混匀配制成500X储备溶液，避光保存。

注：20 µL储备溶液可满足1块板检测，储存时需密封管口。

工作溶液配制

将20 µL 500X Amplite™ ROS Red储备液加入10 mL检测缓冲液（组分B），混匀配制成工作液。

注意：此Amplite ROS Red工作溶液在室温下稳定至少2小时。

细胞样本制备指南

详见：www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

标准实验流程

1.向细胞培养板中加入Amplite™ ROS Red工作液：96孔板：每孔100 μL；384孔板：每孔25 μL

2.将细胞培养板置于5% CO₂、37℃培养箱中孵育60分钟

3.96孔板：每孔加入20 μL 11X浓度测试化合物（可用PBS或HHBS等缓冲液配制）；384孔板：每孔加入10 μL 6X浓度测试化合物；对照组：加入等体积化合物缓冲液

4.将细胞培养板在室温或37℃（5% CO₂环境）至少孵育15分钟，（如使用1 mM H₂O₂处理Hela细胞需30分钟）

5.使用荧光酶标仪（底部读数模式，激发/发射波长=520/605 nm，截止波长590 nm）监测荧光强度变化，或通过配备相应滤光片组（激发/发射=520/605 nm，Texas Red滤光片）的荧光显微镜观察细胞。

试剂应用文献