活性氧 Cell Meter 荧光法线粒体超氧化物活性检测试剂盒

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产品优势  

1.细胞膜穿透性好，能快速靶向线粒体

2.高选择性，特异性检测超氧阴离子

 

适用范围

用于标记活细胞

 

产品介绍

线粒体是细胞内超氧化物的主要来源。适度水平的超氧化物生成对基因表达、信号转导以及肌肉耐力训练适应等关键生理过程的调控至关重要。然而，线粒体超氧化物生成失控会引发细胞氧化损伤，进而参与癌症、心血管疾病、神经退行性疾病及衰老等多种病理过程的发生发展。检测细胞内线粒体超氧化物水平对于理解细胞氧化还原调控机制及其失调的病理影响具有重大意义。

Cell Meter™荧光法线粒体超氧化物检测试剂盒采用MitoROS™ 520超氧化物荧光探针，该探针具有细胞膜穿透性强、线粒体靶向性高、检测特异性好等特点，与超氧化物反应后可产生绿色荧光信号，仅需1小时孵育即可实现活细胞线粒体超氧化物的灵敏检测，同时兼容流式细胞术定量分析和荧光显微镜观察两种检测模式。

 

 

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荧光显微镜
Ex:	FITC 滤波片组
Em：	FITC 滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板
滤波片组:	FITC 滤波片组

样本实验方案

概述

荧光显微镜检测方案：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.加入MitoROS™520工作液

4.将细胞在37°C培养1小时

5.使用FITC滤光片组观察荧光信号

 

流式细胞仪检测方案：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.加入MitoROS™ 520原液，37℃培养1小时

4.使用流式细胞仪530/30 nm滤光片（FITC通道）检测荧光强度

 注意：所有组分使用前需室温解冻。

 

储备液配制

所有储备液配制后应分装为单次使用量，于-20°C冷冻保存，并避免反复冻融。

MitoROS™ 520储备液（500X）配制方法

取50 µL二甲基亚砜（DMSO，组分C）加入MitoROS™ 520（组分A）冻干粉瓶中，充分混匀

注意：1.复溶后的MitoROS™ 520储备液按25 µL/板的用量分装使用；

           2.未使用的溶液需严格密封、避光保存于-20°C以下环境，可稳定储存1个月以上；

           3.严禁反复冻融以保持试剂活性。

 

工作液配制说明（仅限荧光显微镜检测使用）

取5 μL 500X MitoROS™ 520 DMSO储备液，加入2 mL检测缓冲液（组分B）中，充分混匀

注意：工作液稳定性较差，需现配现用

细胞样本制备指南

具体操作步骤请参考：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

操作步骤

荧光显微镜/ 96孔微孔板检测流程：

1.用10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384孔板）在培养基或所需缓冲液（例如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入等量的化合物缓冲液。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意：我们用5μM抗霉素A（AMA）在37°C处理RAW 264.7巨噬细胞2小时以诱导超氧化物。 

3.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS™520工作溶液加入到细胞板中。

4.将细胞在37°C孵育1小时，并使用荧光显微镜FITC滤光片组采集荧光图像。

 

流式细胞仪检测流程：

1.根据需要处理细胞。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意：我们用50μM抗霉素A（AMA）在37℃处理Jurkat细胞2小时以诱导超氧化物。

3.将1μL/ 0.5 mL MitoROS™520原液（500X）细胞加入细胞中。

4.将细胞在5％CO 2,37℃培养箱中孵育1小时，并使用流式细胞仪530/30 nm滤光片（FITC通道）检测荧光强度