Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测
| Ex (nm) | 649 | Em (nm) | 663 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
15分钟内即可与活化caspases发生反应
红色荧光标记便于流式细胞术直接检测
适用范围
用于Caspase 活性检测
产品介绍
Cell Meter™检测试剂盒系列是用于监测细胞活性的专业工具组合，可通过多种参数评估细胞状态。本试剂盒通过检测活细胞中多种半胱天冬酶（包括caspase-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8和-9）的活化水平来监测细胞凋亡过程。半胱天冬酶的激活被广泛认为是细胞凋亡的可靠指标。且多数能特异性识别Val-Ala-Asp（VAD）保守肽段序列。
Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒采用TF5-VAD-FMK作为广谱荧光指示剂，TF5-VAD-FMK 具有细胞渗透性，无毒性，能与凋亡细胞中激活的 caspase-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8 和 - 9 不可逆结合。一旦与半胱天冬酶结合，这种红色荧光试剂就会保留在细胞内。该结合会阻止半胱天冬酶进一步催化反应，但不会阻止凋亡进程。
将该试剂在加入培养基后，15分钟内即可与活化caspases发生反应，试剂盒提供所有必要组分及优化后的检测方案，可用于定量检测凋亡细胞中大多数激活的半胱天冬酶活性，或用于caspase抑制剂的筛选。其绿色标记可通过流式细胞术直接检测凋亡细胞中的活化caspase。。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 640 nm |
| Em： | 660/20 nm |
| 通道: | APC 通道 |
样品实验方案
简要概述
调整细胞密度至5×10⁵-1×10⁶个细胞/mL
将0.5 µL细胞溶液中加入1 µL 500X TF5-VAD-FMK
将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育1-4小时
离心收集细胞并将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液或生长培养基中
流式细胞仪检测（APC通道，660/20 nm滤光片）
实验步骤
1.制备细胞悬液（0.5 mL/样本，密度5×10⁵-1×10⁶个细胞/mL）
注意：需根据细胞系优化凋亡诱导密度
2.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立阳性和阴性对照。
3.向处理过的细胞中加入1µL 500X TF5-VAD-FMK（组分A）。
4.将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育1-4小时。
注意：贴壁细胞：需用0.5 mM EDTA温和消化，血清培养基洗涤后孵育
孵育时间：根据细胞类型和浓度优化（1-4小时）
5.洗涤并离心细胞两次。将细胞重悬于0.5 mL分析缓冲液（组分B）或生长培养基中。
注意：TF5-VAD-FMK是荧光的；因此，重要的是洗净任何未结合的试剂以除去背景。
6.如果需要，用 DNA 染料（例如Green-DCS 用于死细胞）标记细胞,可以用530/30 nm滤光片（FITC通道）检测
7.如果需要，请固定细胞
8.使用660/20 nm滤光片（APC通道）检测荧光强度，设门分析目标细胞群（排除碎片）
