Cell Meter 比色法细胞内脂质氧化损伤(MDA)检测试剂盒

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产品优势

无需TBARS加热步骤即可实现MDA快速检测

 

适用范围

用于细胞内MDA检测

 

产品介绍

脂质过氧化是指不饱和脂肪酸、磷脂、糖脂、胆固醇酯及胆固醇发生氧化降解的过程，其中丙二醛（MDA）是最常用的生物标志物。传统检测方法依赖硫代巴比妥酸（TBA）与MDA的显色反应，但存在明显局限：反应特异性差（与其他醛类交叉反应）、需强酸性环境（pH 2-3）及高温加热（90-100℃），导致操作繁琐且结果可靠性不足。

Cell Meter™比色法脂质过氧化（MDA）定量试剂盒采用创新MDA Blue™技术，无需TBARS加热步骤即可实现MDA快速检测。该试剂盒通过特异性显色反应生成蓝色产物（检测波长695nm），仅需30分钟即可完成检测，且其他醛类物质干扰极低，为研究人员提供了更高效精准的解决方案。

 

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加MDA标准和/或测试样品（50 µL）
2.准备并添加MDA Blue （10 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.加入反应溶液（40 µL）
5.监测OD在695 nm处的增加

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免反复冻融。

MDA标准储备液（100 mM）：

向组分C（MDA标准品）中加入100 µL双蒸水，充分混匀合。

注意：未使用的MDA储备液需分装保存于-20°C

 

2.标准溶液配制

MDA标准

取10 μL MDA标准品原液（100 mM）加入990 μL稀释缓冲液（组分B）中，混匀后得到1000 μM MDA标准工作液。随后使用稀释缓冲液进行梯度稀释，依次配制800、600、400、200、100、50及0 μM的系列浓度标准品溶液。

 

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板中MDA标准品和测试样品的布局。 MDA = MDA标准（MDA1-MDA7）； BL =空白对照； TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MDA1	MDA1	...	...
MDA2	MDA2	...	...
MDA3	MDA3
MDA4	MDA4
MDA5	MDA5
MDA6	MDA6
MDA7	MDA7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
MDA1-MDA7	50ul	连续稀释
BL	50ul	稀释缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样品

MDA测定

1.向透明底96孔板中加入50 µL MDA标准品、空白对照及测试样本（具体布局参见表1和表2），若使用384孔板，每孔加入25 µL样本

2.将10 µL /孔的MDA Blue （组分A）添加到MDA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中。

注意：对于384孔板，将25 µL样品，5 µL MDA Blue 溶液添加到每个孔中。

注意：请分装成一次性使用的组分A，并在-20ºC下闲置存放，并避免光照。

3.室温避光孵育反应10-30分钟。

4.加入40 µL反应溶液（组分D）使总测定体积为100 µL /孔。

注意：384孔板每孔加20 µL反应溶液（组分D），终体积50 µL/孔

5.使用具有光径校正功能的酶标仪，在695-700 nm波长处监测吸光度变化