Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光

分离细胞的检测方案

概述

用测试化合物制备细胞，密度为5×105至2×106个细胞/ mL

将TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中

在室温下孵育1小时

沉淀细胞，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 550 / 595nm处分析细胞

注：使用前将所有部件在室温下解冻。

原液配制

FAM-DEVD-FMK DMSO原液 (150X)：

将 50 µL DMSO 添加到 FAM-DEVD-FMK（组分 A）小瓶中。

有关细胞样品制备的指南，请访问 https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html。

表1：流式细胞术和荧光显微镜的荧光强度监测

表2 荧光微板读数器的荧光强度监测 。 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：

1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意：不同细胞系的最适凋亡诱导密度需单独评估。

2.通过向TF3-DEVD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液。 将150×TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育1小时。

注1：对于TF3-DEVD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2：对于贴壁细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

3.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1：TF3-DEVD-FMK具有荧光特性，需充分洗脱未结合试剂以降低背景信号。

注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤5。

4.如果需要，用DNA染色标记细胞（如死细胞标记用碘化丙啶PI，或全细胞核染色用Hoechst）。

5.荧光显微镜/酶标仪检测：将100 µL细胞悬液（调整至2-5×10⁵ cells/100 µL）加入96孔黑色微孔板

流式细胞仪检测：参照表1或表2参数设置

注意：对于分离的细胞，细胞浓度应调整为每微量滴定板孔 2 - 5 X 105 个细胞/100 µL 等份。

试剂应用文献