Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞。

2.与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。

3.洗涤细胞。

4.可选：用4％甲醛固定细胞。

5.使用荧光酶标仪检测（激发/发射波长=490/525 nm，截止波长515 nm）、配备FITC滤光片的荧光显微镜或FITC通道流式细胞仪进行检测

工作溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte  Green（组分A）添加到50μL的反应缓冲液（组分B）中，使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 注意避光。

注意：需根据具体细胞系优化细胞密度

细胞样本制备指南请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

细胞制备

1.按特定方案培养细胞至适合凋亡诱导的密度（推荐：96孔板贴壁细胞每孔3-5万个；悬浮细胞密度1-2×10^6个/mL），同时设置未诱导的阴性对照组（与诱导组相同细胞密度）

注：示例中使用100 nM-1 μM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时诱导凋亡（详见图1）

染色和固色：

1.吸弃细胞培养基。

2.向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。

3.在37°C下孵育30-60分钟。

4.吸弃工作液，用200 µL/孔PBS洗涤1-2次

5.向每个样品中添加100uL反应缓冲液（组分B）。

6.使用荧光酶标仪（Ex/Em=490/525 nm，截止515 nm）、FITC荧光显微镜或流式细胞仪检测

7.可选步骤：

从步骤5吸弃反应缓冲液，每孔加入100 µL 4%甲醛固定液（需自备）。

注：悬浮细胞需加入适量（如2×10^6个细胞/mL）4%甲醛固定液。

8.室温固定20-30分钟

9.吸弃固定液

10.用PBS洗涤2-3次，每孔换用100 µL PBS

11.使用TRITC滤光片荧光显微镜或FL3通道流式细胞仪检测荧光强度

12.可选步骤：

用1X Hoechst（组分C，Ex/Em = 350/460 nm）进行细胞核染色用于图像分析

试剂应用文献