Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合微孔板检测
Ex (nm) | 613 | Em (nm) | 631 |
分子量 | - | 溶剂 | - |
存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
1.高特异性:依赖于线粒体膜电位(ΔΨm)选择性积聚在活性线粒体中
2.细胞兼容性:适用于增殖细胞、非增殖细胞,兼容悬浮细胞和贴壁细胞的检测。
3.稳定性好:抗光漂白能力强,适合长时间活细胞成像
4.高信噪比:和其他染料相比,信噪比更高,成像更清晰
适用范围
用于标记活细胞
产品介绍
Cell Meter™ 红色线粒体膜电位检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的试剂盒,本试剂盒通过检测线粒体膜电位(ΔΨm)的丧失来特异性监测细胞凋亡过程。当线粒体膜电位崩溃时,会引发线粒体通透性转换孔(mPTP)开放,导致细胞色素C释放至胞质,进而激活下游凋亡级联反应。
该试剂盒采用专利阳离子染料MitoLite Red™,在正常细胞中特异性积聚于线粒体(强荧光信号),而在凋亡细胞中因膜电位丧失导致荧光强度显著降低。本试剂盒提供优化的检测方案和全部必需组分,支持96孔板和384孔板的高通量筛选,适用于凋亡激活剂和抑制剂的快速筛选。
适用仪器
荧光酶标仪 |
|
Ex: | 610 nm |
Em: | 650 nm |
Cutoff: | 630 nm |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
读取模式: | 底读模式 |
样品实验方案
简要概述
1.准备细胞
2.加入待测化合物
3. 加入MitoTell™ Red工作液:96孔板:100 µL/孔; 384孔板:25 µL/孔;
4. 37°C、5% CO₂培养箱中孵育30分钟
5. 加入Assay Buffer B: 96孔板:50 µL/孔; 384孔板:12.5 µL/孔;
6.用荧光酶标仪检测(底读模式): 激发/发射波长:610/650 nm; 截止波长:630 nm 或 使用荧光显微镜(Cy5滤光片)观察
(实验前需将所有试剂组分于室温解冻,确保完全溶解并混匀后再使用。)
工作液配制方法
将50 µL 200× MitoTell™ Red(组分A)加入10 mL Assay Buffer A(组分B)中,充分混匀后即配制成MitoTell™ Red工作液,需避光保存。
细胞样本制备指南:
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
实验步骤
1.使用待测化合物处理细胞至预定时间以诱导凋亡,并同步设立平行对照实验
注:我们采用20 μM CCCP处理HeLa细胞15分钟可显著改变线粒体膜电位。CCCP/FCCP可与MitoTell™ Red同步加入,为获得好的效果,建议针对不同细胞系进行CCCP/FCCP浓度梯度优化(推荐测试范围:5-50 μM)。
2.向96孔板每孔加入100 µL MitoTell™ Red工作液(384孔板每孔25 µL)。
3.将培养板置于37℃避光孵育15-30分钟
注:具体孵育时间需根据细胞类型及浓度优化,建议实验前进行条件摸索
4.向96孔板每孔加入50 µL Assay Buffer B(组分C)(384孔板12.5 µL/孔)。
注:加样后切勿洗涤细胞;悬浮细胞需在加入缓冲液后以800 rpm离心2分钟,然后制动。
5.在加入Assay Buffer B(组分C)后10-30分钟内,使用荧光酶标仪(底读模式,激发/发射=610/650 nm,截止波长630 nm)监测荧光强度,或通过荧光显微镜(Cy5滤光片组)观察荧光信号。