Cell Meter Caspase 3/7/8/9活性细胞凋亡复用检测试剂盒 三色荧光

适用仪器

样品实验方案

简要概述

用测试化合物准备细胞

加入等量的半胱天冬酶工作溶液

在室温下孵育30分钟至1小时

检测荧光强度

溶液配制

工作溶液配制

1.单胱天蛋白酶活性工作液：将50 µL底物（组分A，B或C）加入10 mL分析缓冲液（组分D）中，制成caspase 3/7，caspase 8或caspase 9工作溶液，并充分混合。

2.双胱天蛋白酶或三胱天蛋白酶活性工作液：将每种半胱天冬酶底物50 µL加到10 mL的测定缓冲液（组分D）中，制成工作溶液。

注意：请按比例准备被测底物溶液和所需的体积。

实验步骤

1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞需要3-5小时）以诱导凋亡。

3.加入100 µL /孔/ 96孔或25 µL /孔/ 384孔的所需caspase分析工作溶液。

4.在避光的条件下，在室温下孵育平板至少30至60分钟。

注意：如果需要，可在室温下添加测定上样溶液10分钟之前，向选定的样品中添加1 µL 1 mM caspase抑制剂，以确认对caspase活性的抑制。

5.按照顶部或底部读取模式，检测荧光强度。

注意：有时，底部读数可提供更好的信噪比，如果使用底部读数模式，则以800 rpm的速度离心细胞板（特别是悬浮细胞）2分钟（制动）。

表1. Caspases 3 / 7、8和9的光谱波长。