Cell Meter 钙检测免洗和免丙磺舒检测试剂盒*适用于酶标仪*

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产品优势  

1. 无需洗涤步骤，简化实验流程，减少细胞损伤风险

2.不含丙磺舒，避免传统钙检测试剂中丙磺舒对有机阴离子转运体的抑制作用

3.钙结合后荧光信号稳定持久

 

适用范围

用于钙离子检测

 

产品介绍

Cell Meter 钙检测免洗和免丙磺舒检测试剂盒可实现均相荧光检测，无需使用动力学读数模式即可监测细胞内钙离子流动。该试剂盒适用于不具备内置液体分配系统或动力学读数功能的底部读数型荧光酶标仪。将Fluo-8E™ AM染料加载至目标细胞后，无需洗涤步骤，仅需通过液体分配器或手动移液加入钙流激动剂，即可直接进行荧光读数。

Fluo-8E™ AM染料可通过被动扩散跨膜进入细胞。胞内酯酶会水解其疏水性封闭基团，生成带负电荷的荧光染料并被滞留在细胞内。该染料与钙离子结合后荧光强度显著增强且信号持久。当表达特定GPCR的细胞受激动剂刺激时，受体信号通路会引发钙离子释放，使Fluo-8E™荧光信号急剧升高。

Fluo-8E™凭借其超高灵敏度（荧光增强超过100倍）和长效荧光信号等特性，成为无液体转移及动力学读数功能荧光酶标仪检测细胞钙离子的理想指示剂。Cell Meter 钙检测免洗和免丙磺舒检测试剂盒支持96孔板或384孔板规格的实验操作。

 

适用仪器 

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荧光酶标仪
激发:	490nm
发射:	525nm
Cutoff：	515nm
推荐孔板：	黑色透明
读取模式：	底读模式

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.加入Fluo-8E AM染料工作溶液（96孔板：100 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）

3.37°C孵育60分钟

4.加入50 µL钙离子刺激剂

5.监测荧光强度（Ex / Em = 490/525 nm）

注意：实验前需将所有试剂组分室温解冻

 

溶液制备 

储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。

Fluo-8E AM储备溶液

在Fluo-8E AM（组分A）小瓶中加入10 µL DMSO，并充分混匀。

注意：10 µL Fluo-8E AM储备溶液可完成50次测定（半块96孔板）。

注意：分装密封后-20°C避光保存＞1个月，避光并避免反复冻融。

 

1X检测缓冲液

将10X Pluronic® F127 Plus（组分B，1 mL）加入9 mL HHBS（组分C）混匀

 注意：10mL缓冲液（1X）足可以满足一块板需求。 分装并在<-20°C下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免反复冻融。

 

工作溶液

Fluo-8E AM染料工作液：

将10 µL Fluo-8E AM储备溶液添加到5 mL 1X检测缓冲液中，并充分混匀。

注意：此工作溶液在室温下稳定性≥2小时

点击查看细胞制备方案

 

样品操作及实验分析

1.直接向细胞板中加入Fluo-8E™AM工作液（96孔板：100 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）。

无需去除原生长培养基

2. 37°C、5% CO₂培养箱中孵育45-60分钟

3.用HHBS或自选缓冲液配制5X钙离子刺激剂

4.加入50 µL刺激剂，通过底部读取模式通过监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光强度立即运行钙通量测定。

 重要提示： 刺激剂加入后1分钟内启动检测，且所有样本需保持相同的加药-检测间隔时间