活细胞染色 CytoTell 橙色

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适用范围

用于活细胞分析

 

产品介绍

流式细胞术结合荧光染色是分析异质性细胞群体的强大工具。在现有荧光染料中，CFSE作为细胞增殖指示剂是活细胞分析的首选工具。然而，CFSE 及其荧光素类似物无法用于 GFP（绿色荧光蛋白）转染细胞，也不能用于需使用 FITC（异硫氰酸荧光素）标记抗体的实验 —— 因为 CFSE 及其荧光素类似物的激发光谱和发射光谱与 GFP 或 FITC 几乎完全一致（会产生荧光信号干扰）。

CytoTell™系列染料可在405 nm、488 nm或633 nm等主流激光线下高效激发，并产生多色发射光谱。该系列染料细胞毒性极低，且因其激发/发射光谱与荧光素截然不同，可同时用于GFP细胞系或FITC标记抗体的多色实验。

CytoTell™Orange能实现均匀的细胞染色。随着细胞分裂，染料会均等分配至子代细胞，通过检测荧光强度的连续半减现象即可追踪增殖过程，最多可观测8代细胞。该染料还可用于标记细胞的长期示踪研究。使用双参数散点图分析可更好区分各代细胞，尤其能清晰解析未分裂细胞与第一代细胞。

CytoTell™ Orange标记的细胞，可采用标准甲醛固定剂和皂苷透化缓冲液进行固定透化处理，用于细胞内靶标分析。该染料的峰值激发波长为542 nm，可由蓝激光（488 nm）和绿激光（532 nm）激发；峰值发射波长约为560 nm，可通过575/26带通滤光片检测（相当于RPE）。

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞

2.加入1X染料工作液

3.在室温或37 ^o C 下将染料与细胞共孵育10至30分钟

4.去除染料工作液

5.使用流式细胞仪和适当的过滤器进行分析

重要说明

实验开始前，将试剂盒所有组分置于室温。

注：CytoTell™染料为冻干粉末。若在 - 20°C 下避光储存且避免反复冻融，其稳定性至少可达 6 个月。

 

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装为单次使用量，制备后保存于-20°C，避免反复冻融

CytoTell 染料储备液（500X）：

向染料粉末瓶中加入500 µL DMSO，涡旋振荡混匀制备储备液（500X）

注意：储备液需现配现用；剩余溶液应分装后于<-20°C冷冻保存。避免反复冻融并避光

 

工作溶液配制

CytoTell 染料工作溶液（1X）：

使用前将500X DMSO储备液按1:500比例用HHBS缓冲液（Hanks平衡盐溶液含20 mM Hepes）或自选pH 7缓冲液稀释（如：1 µL 500X储备液加入500 µL缓冲液），涡旋振荡混匀

注意：工作液终浓度需根据不同细胞类型和/或实验条件进行优化，建议测试至少跨越十倍浓度的梯度范围。例如CytoTell™ Red在某些细胞类型中的使用量可能远低于推荐浓度

 

实验操作流程

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.离心细胞以获得每管1-5×10 ⁵个细胞。

3.在500 µL CytoTell 染料工作溶液中重悬细胞。

可选：可不移除培养基直接向细胞中加入500X DMSO储备液（如：向500 µL细胞悬液中加入1 µL 500X储备液）

4.室温或37°C将细胞与染料溶液孵育10至30分钟，避光。

5.从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到1-5×10 ^5个细胞。

6.用流式细胞仪或荧光显微镜在相应激发/发射波长下监测荧光变化