活细胞染色 CytoTell 红色 650

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适用范围

用于活细胞分析

产品介绍

流式细胞术结合荧光染色是分析异质性细胞群体的强大工具。在现有荧光染料中，CFSE作为细胞增殖指示剂是活细胞分析的首选工具。然而，CFSE 及其荧光素类似物无法用于 GFP（绿色荧光蛋白）转染细胞，也不能用于需使用 FITC（异硫氰酸荧光素）标记抗体的实验 —— 因为 CFSE 及其荧光素类似物的激发光谱和发射光谱与 GFP 或 FITC 几乎完全一致（会产生荧光信号干扰）。

CytoTell™系列染料可在405 nm、488 nm或633 nm等主流激光线下高效激发，并产生多色发射光谱。该系列染料细胞毒性极低，且因其激发/发射光谱与荧光素截然不同，可同时用于GFP细胞系或FITC标记抗体的多色实验。

CytoTell™ Red 650是一种红色荧光染料，能实现均匀的细胞染色。随着细胞分裂，染料会均等分配至子代细胞，通过检测荧光强度的连续半减现象即可追踪增殖过程，最多可观测8代细胞。该染料还可用于标记细胞的长期示踪研究。使用双参数散点图分析可更好区分各代细胞，尤其能清晰解析未分裂细胞与第一代细胞。

CytoTell™ Red 650标记的细胞可采用标准甲醛固定剂和皂苷透化缓冲液进行固定透化处理，用于细胞内靶标分析。该染料的最大激发波长为 630 纳米，可被红色（633 纳米）激光谱线激发。其最大发射波长为 660 纳米，可通过 660/20 带通滤光片（与 APC、Alexa Fluor® 647 或 Cy5® 所用滤光片等效）进行检测，这一特性使其可兼容那些使用 GFP（绿色荧光蛋白）或 FITC（异硫氰酸荧光素）抗体开展的多色细胞分析应用场景。

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞

2.加入1X染料工作液

3.在室温或37 ^o C 下将染料与细胞共孵育10至30分钟

4.去除染料工作液

5.使用流式细胞仪和适当的过滤器进行分析

重要说明

实验开始前，将试剂盒所有组分置于室温。

注：CytoTell™染料为冻干粉末。若在 - 20°C 下避光储存且避免反复冻融，其稳定性至少可达 6 个月。

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装为单次使用量，制备后保存于-20°C，避免反复冻融

CytoTell 染料储备液（500X）：

向染料粉末瓶中加入500 µL DMSO，涡旋振荡混匀制备储备液（500X）

注意：储备液需现配现用；剩余溶液应分装后于<-20°C冷冻保存。避免反复冻融并避光

工作溶液配制

CytoTell 染料工作溶液（1X）：

使用前将500X DMSO储备液按1:500比例用HHBS缓冲液（Hanks平衡盐溶液含20 mM Hepes）或自选pH 7缓冲液稀释（如：1 µL 500X储备液加入500 µL缓冲液），涡旋振荡混匀

注意：工作液终浓度需根据不同细胞类型和/或实验条件进行优化，建议测试至少跨越十倍浓度的梯度范围。例如CytoTell™ Red在某些细胞类型中的使用量可能远低于推荐浓度

实验操作流程

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.离心细胞以获得每管1-5×10 ⁵个细胞。

3.在500 µL CytoTell 染料工作溶液中重悬细胞。

可选：可不移除培养基直接向细胞中加入500X DMSO储备液（如：向500 µL细胞悬液中加入1 µL 500X储备液）

4.室温或37°C将细胞与染料溶液孵育10至30分钟，避光。

5.从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到1-5×10 ^5个细胞。

6.用流式细胞仪或荧光显微镜在相应激发/发射波长下监测荧光变化

试剂应用文献