D-荧光素钾盐 CAS 115144-35-9

产品货期

现货

产品优势

水溶性和稳定性好

适用范围

用于萤光素酶基因检测、活体成像以及ATP定量检测

产品介绍

D-萤光素是萤光素酶基因报告系统的生物发光底物，常用于体内成像研究。

从北美萤火虫（Photinus pyralis）及其他甲虫物种中分离的萤光素酶，能以ATP依赖性方式氧化萤光素并在此过程中产生发光。该化学发光反应的峰值波长为560 nm，发光强度与萤光素酶活性成正比，可通过化学发光检测仪或液闪计数器进行监测。

通过引入Luc基因，萤光素酶/萤光素报告系统常用于研究瞬时和稳定转染的真核细胞转录活动。与其他方法相比，该发光系统具有极高灵敏度——由于背景信号极低甚至为零，可实现低水平基因表达的检测。此系统还可用于ATP定量检测，其应用范围涵盖细胞活性检测、食品安全质量保证（表面污染检测）等领域。但与辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等比色系统相比，其缺点在于萤光素酶对化学修饰的耐受性较低。

本D-萤光素产品以单钾盐形式提供冻干粉末，分子量为318.41道尔顿（C11H7N2O3S2•K）。具有水溶性，易溶于水性缓冲液，并能穿透细胞膜用于活细胞实验。在体内条件下，其对萤光素酶的Km值约为1 mM；而在体外条件下Km值为10 µM（Ignowski等，2004）。D-萤光素有时也被称为甲虫萤光素或萤火虫萤光素，这些术语具有等效性。除钾盐形式外，还可提供钠盐、游离酸等多种形式的D-萤光素产品。

注意事项

1.一般活体用DPBS，避免渗透压影响。体外细胞一般用无菌水，避免盐粒子影响信号通路级联反应，尤其是钙信号。

2.该产品用DPBS溶解后，如果需要保存，请调整如下浓度及pH保存：100 mM, pH ~6.5, -20℃避光。pH过高，可能会导致染料失效。当溶液的pH<6.5（发生水解作用）或>7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。 如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。

3.Luc的Ex/Em及其他相关内容链接：Spectral properties of luciferin and EGFP. A: Normalized excitation and... | Download Scientific Diagram (researchgate.net)

操作方法 

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子，它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

用于体外生物发光图像测定的实施方案

1在无菌水中制备100mM（100-200X）荧光素原液。混合均匀。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免反复冻融。

2.在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

3.从培养细胞中分离培养基。

4.将荧光素工作溶液加入细胞中，并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

用于体内生物发光图像测定的实施方案

1.在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液，不含Mg²⁺和Ca²⁺。 混合均匀。

2.过滤器通过0.2μm过滤器过滤溶液。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免反复冻融。

3.在动物体重150mg / kg（或10μL/ g荧光素储备溶液）成像前10-15分钟腹膜内（i.p.）注射荧光素。

注意：应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究，以确定峰值信号时间。

荧光素报告分析分子测定的实施方案

1.在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免反复冻融。

2.制备1mM D-荧光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO4的25mM tricine缓冲液，pH7.8。

3.将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。

4.根据制造商的说明，使用荧光素工作溶液对光度计进行预调。

5.注入200μl荧光素工作溶液，无延迟，10秒积分时间。

注：积分时间（integration time）是指在光学测量中，仪器收集光信号并累积的时间长度。这个时间越长，仪器能够收集到的光信号就越多，从而提高测量的灵敏度和准确性。在荧光素实验中，10秒的积分时间意味着仪器在这10秒内不断收集并累积光信号，然后将其用于分析。

注意1：D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液，溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5（发生水解作用）或>7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备，并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。

注意2：D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

注意3：如果检测ATP，请戴上手套并使用无ATP容器，尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压水进行所有试剂制备。

试剂应用文献